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Wie man PCR-Produkte aufteilt, um wiederholte Gefrierschmelzen zu vermeiden
Datum:2025-12-08Lesen Sie:2

Die Entlastung von PCR-Produkten für ein oder zwei Tage bei Raumtemperatur ist kein großes Problem, aber es ist nicht langfristig. Wenn Sie es nur für eine Stunde oder zwei vorübergehend lassen, machen Sie sich keine Sorgen, die DNA ist stabil und wird sich nicht abbauen.

Beachten Sie jedoch, dass nach längerer Entspannung bei Raumtemperatur (z. B. über 24 Stunden) die Streifen beginnen können, sich zu verschwimmen und das Risiko des Abbaus zunimmt. Bei hohen Umgebungstemperaturen wird der Abbau schneller.

Kurzfristige Lagerung (z. B. innerhalb von einem oder zwei Tagen), 4 ° C in einem Kühlschrank, kann die Enzymaktivität effektiv hemmen und stabil bleiben. Langfristige Aufbewahrung (mehrere Monate oder sogar länger) muss bei -20 ° C oder -80 ° C gefroren werden, was die Standardpraxis ist. Wenn die Bedingungen es erlauben, mit speziellen Kits gereinigt und gefroren, ist die Wirkung besser, um wiederholte Gefrierschmelzung zu vermeiden. Für eine weitere Verlängerung der Haltbarkeitsdauer von PCR-Produkten wird eine Strategie der Fraktionierung empfohlen. Das Produkt wird in mehrere sterile EP-Röhrchen aufgeteilt, in denen jeweils eine einmalige Dosis gelagert wird, um das Risiko eines DNA-Bruchs durch wiederholtes Gefrieren zu vermeiden. Bei der Aufteilung ist darauf zu achten, dass die Rohrlösung kurzzeitig zentrifiziert wird, um zu verhindern, dass Tropfenrückstände Verschmutzung verursachen. Für Proben mit hohem Wert kann eine moderate Menge Glycerin (Endkonzentration 5-10%) in den Puffer hinzugefügt werden, der die physikalische Schädigung der DNA durch Eiskristalle reduziert.

Wenn Laborbedingungen begrenzt sind, kann die "Salz-Ethanol-Fällungsmethode" zur vorübergehenden Aufbewahrung verwendet werden: 1/10 des Volumens von 3M Natriumacetat und 2,5-mal das Volumen von vorgekühltem wasserlosem Ethanol hinzugefügt werden und auf -20 ° C gemischt werden. Diese Methode ist zwar nicht so stabil wie die professionelle Gefrierung, aber in unerwarteten Fällen wie Stromausfällen kann die DNA-Integrität 1-2 Wochen aufrechterhalten, wenn sie verwendet wird, muss sie nur zentrifugiert werden, 70% Ethanol nach dem Spülen wieder suspendiert werden.

Es ist erwähnenswert, dass die Produkte, die fluoreszierende Markierungen enthalten, empfindlich für Licht sind, sollten mit Lichtschutzrohren gelagert werden, auch in einer Umgebung von 4 ° C mit Aluminiumfolie verpackt werden. Für Proben, die einen grenzüberschreitenden Transport erfordern, wird die Verwendung einer DNA-stabilen Speicherkarte empfohlen. Dieses spezielle Filterpapier in der Größe einer Folie kann die Nukleinsäure bei Raumtemperatur für mehrere Monate speichern und ist besonders geeignet für die Probenahme im Feld.