Dieses Kit darf nur für wissenschaftliche Forschung verwendet werden und nicht für medizinische Diagnosen.

Mäuse（Maus）I-Faktor-Komplementssegment 3b (iC3b)ELISA-Testkit

Gebrauchsanweisung

Prüfprinzip

Die Kit verwendet ein Dual-Kàng-Körper-Schritt-Centrifugalpharase-kombiniertes Immunabsorptionstest (ELISA). Zur Vorverpackung von I-Faktor-Komplement-Fragment 3b (iC3b) kàng Körper verpackt in Mikroporen, in der Folge Proben, Standardprodukte, HRP-gekennzeichneten Test kàng Körper hinzugefügt, nach der Wärme und chè Boden gewaschen. Mit dem Substrat TMB wird TMB durch Peroxidase-Katalyse in Blau und unter der Wirkung der Säure in das endgültige Gelb umgewandelt. Die Farbe ist positiv korreliert mit dem I-Faktor-Komplement-Fragment 3b (iC3b) in der Probe. Messung der Absorption (OD-Wert) mit einem Enzym-Scaler bei einer Wellenlänge von 450 nm zur Berechnung der Probenkonzentration.

Verfahren zur Sammlung, Verarbeitung und Aufbewahrung von Proben

1. Serum: Verwenden Sie ein Thermogen- und Endotoxinfreies Röhrchen, vermeiden Sie jede zelluläre Stimulation während des Betriebs und trennen Sie das Serum und die roten Blutkörperchen schnell und vorsichtig für 10 Minuten nach der Sammlung von Blut mit 3000 Wendungen.

2. Plasma: EDTA, Zitrate oder Hepatin Antikoagulation. 3.000 Drehungen 30 Minuten Entfernen.

3. Zellreinigung: 3000 Drehungen Zentrifuge für 10 Minuten, um Partikel und Polymere zu entfernen.

4. Gewebe homogenisieren: Gewebe in ausreichender Menge physiologisches Salzwasser massieren. 3.000 Drehungen in 10 Minuten entfernen.

5. Aufbewahrung: Wenn die Probe nach der Sammlung nicht rechtzeitig erkannt wird, verteilen Sie sie bitte nach einer Dosis, einfrieren Sie sie bei -20 ° C, vermeiden Sie wiederholtes Gefrierschmelzen, auffrieren Sie sie bei Raumtemperatur und stellen Sie sicher, dass die Probe gleichmäßig und vollständig aufgefroren ist.

Eigentümer

1. Enzymmetrie (450 nm)

2. Präzisionsproben und Pistolenkopfe: 0,5-10uL, 2-20uL, 20-200uL, 200-1000uL

3. 37 ° C Thermostat

Betriebsmaßnahmen

1. Lagern Sie die Kit bei 2-8 ° C, vor der Verwendung Raumtemperatur Gleichgewicht für 20 Minuten. Das konzentrierte Waschmittel aus dem Kühlschrank wird Kristallisation haben, was zu einem normalen Phänomen gehört, und das Wasserbad wird nach der vollständigen Auflösung des Kristalls wán erhitzt.

2. Die im Experiment nicht verwendeten Platten sollten sofort in die selbstverschlossene Beutel zurückgelegt und versiegelt (bei niedriger Temperatur getrocknet) aufbewahrt werden.

Die Norm S0 mit einer Konzentration von 0 kann als negative Kontrolle oder Leere betrachtet werden. Die Probe wurde nach der Anleitung fünfmal verdünnt und das Endergebnis wurde mit 5 multipliziert, um die tatsächliche Konzentration der Probe zu erreichen.

4. Wärmerüstung in strikter Übereinstimmung mit der in der Anleitung angegebenen Zeit, Flüssigkeitsmenge und Reihenfolge.

5. Alle flüssigen Komponenten vor der Verwendung vollständig schütteln.

Zusammensetzung des Kits

Hinweis: Die Standardkonzentrationen (S0-S5) liegen in der Reihenfolge: 0, 12,5, 25, 50, 100, 200 ng/mL

Vorbereitung von Reagenzien

20-fache Verdünnung des Waschpuffers: Destillationswasser wird 1: 20 verdünnt, d. h. 1 Anteil 20-fache Waschpuffer plus 19 Anteile destilliertes Wasser.

Plattenwaschmethode

1. Handwaschen Sie die Platte: Entfernen Sie die Flüssigkeit im Loch, füllen Sie jedes Loch mit Waschflüssigkeit, lassen Sie die Flüssigkeit im Loch nach 1 Minute stehen, trocknen Sie auf dem Absorbierpapier, so waschen Sie die Platte 5 Mal.

2. Automatische Plattenwaschmaschine: Injizieren Sie 350 μL Waschmaschine pro Loch, einweichen Sie 1min und waschen Sie die Platte 5 Mal.

Betriebsschritte

1. Entfernen Sie die gewünschten Platten aus dem Aluminiumfoliebeutel nach 20 Minuten Raumtemperatur-Gleichgewicht, und die restlichen Platten werden mit einem selbstverschließenden Beutel versiegelt und bei 4 ° C zurückgelegt.

2. Setzen Sie Standardprobenlöcher und Probenlöcher ein, wobei Standardprobenlöcher jeweils mit einer unterschiedlichen Konzentration von 50 μL Standardprodukt kombiniert werden;

3. Zu den Probenlöchern werden zunächst 10 μL der zu prüfenden Probe und 40 μL der Probenverdünnung hinzugefügt; Keine leeren Löcher.

4. Zusätzlich zu den leeren Löchern wird jedes Loch in den Standardlöchern und Probenlöchern mit 100 μL von der Moringa-Peroxidase (HRP) markierten Detektionskàng-Körper hinzugefügt, das Reaktionsloch mit einer Dichtungsmembran versiegelt, 37 ° C Wasserbad oder Thermostat für 60 Minuten.

5. Entfernen Sie die Flüssigkeit, saugen Sie das Wasser auf dem Papier trocknen, füllen Sie jedes Loch mit Waschflüssigkeit, lassen Sie 1min, entfernen Sie die Waschflüssigkeit, saugen Sie das Wasser auf dem Papier trocknen, so wiederholen Sie die Platte 5 Mal (auch mit einer Plattenwaschmaschine).

6. Fügen Sie das Substrat A und B jeweils 50 μL zu jedem Loch und inkubieren Sie das Licht bei 37 ° C für 15 min.

7. Fügen Sie 50 μL Endflüssigkeit pro Loch hinzu und messen Sie den OD-Wert jedes Lochs bei einer Wellenlänge von 450 nm innerhalb von 15 Minuten.

Ergebnis Urteil

Zeichnen Sie eine Standardkurve: In Excel-Arbeitsblättern verwenden Sie die Standardkonzentration als Querkoordinaten, die OD-Werte als Longitudinalkoordinaten, zeichnen Sie eine lineare Regressionskurve des Standardprodukts und berechnen Sie die Konzentrationswerte der Proben nach der Gleichung der Kurve.

Leistung der Kit

Genauigkeit: Die lineare Regression des Standardprodukts mit dem erwarteten Konzentrationskoeffizienten R ist größer als und gleich 0,9900.

Empfindlichkeit: Zui niedrige Detektionskonzentration weniger als 1,0 ng / mL.

Spezifische Eigenschaften: Keine Kreuzreaktion mit anderen löslichen Strukturanalogen.

4. Wiederholbarkeit: Der Variationskoeffizient innerhalb und zwischen den Platten ist weniger als 15%.

5. Lagerung: 2-8 ° C, Licht und Feuchtigkeit geschützt.

6. Gültigkeitsdauer: 6 Monate

Haftungsausschluss

1. Die Kits sind ausschließlich für Forschungszwecke bestimmt und dürfen nicht für klinische Versuche oder menschliche Versuche verwendet werden, sonst sind alle Konsequenzen, die sich daraus ergeben, von den Versuchern getragen und das Unternehmen ist nicht verantwortlich.

2. Streng nach der Anleitung, der Experimentierende verletzt die Anleitung, und die Folgen werden vom Experimentierenden getragen.