inHuman Cell ELISA KitEs ist wichtig, verschiedene experimentelle Bedingungen zu wählen, darunter:

　　

1. Wahl der festen Träger: Viele Substanzen können als feste Träger verwendet werden, wie Polyvinylchlorid, Polystyren, Polyacrylamid, Zellulose usw. Die Form kann in der Form von Holzplatten, Prüfrohren, Perlen usw. sein. Derzeit werden häufig 40-Loch-Polystyrenplatten verwendet. Unabhängig von dem Träger kann vor dem Gebrauch gescreent werden: Pakete werden mit einer gleichen Menge an Antigen versehen, reagieren unter den gleichen experimentellen Bedingungen, beobachten, ob die Farbreaktion gleichmäßig ist, und beurteilen, ob ihre Adsorptionseigenschaften gut sind.

　　

Die Wahl des Antikörpers (oder Antigens): Wenn der Antikörper (oder Antigen) an der festen Trägeroberfläche adsorbiert wird, erfordert es eine gute Reinheit und erfordert im Allgemeinen einen pH zwischen 9,0 und 9,6. Auch die Absorptionstemperatur, die Zeit und die Menge an Protein haben einen gewissen Einfluss. Normalerweise bei 4 ° C für 18-24 Stunden verwendet. Die geeignete Proteinkonzentration muss titriert werden: d.h. unterschiedliche Proteinkonzentrationen (0,1, 1,0 und 10 μg/ml usw.) und gleichzeitig die OD-Werte der positiven Probe unter anderen Testbedingungen beobachtet werden. Wählen Sie eine Konzentration mit einem hohen OD-Wert Zui und einer kleinen Proteinmenge Zui. Für die meisten Proteine ist es in der Regel 1-10 μg / ml.

　　

3. Wahl der Arbeitskonzentration von enzymatischen Antikörpern: Titrieren Sie zunächst die anfängliche Wirksamkeit mit der ELISA-Methode der direkten menschlichen Zellen-ELISA-Kit (siehe Abschnitt über enzymatische Antikörper). Anschließend werden andere Bedingungen festgelegt oder die Arbeitskonzentrationen in formellen Versuchssystemen genau titriert mit der "Quadratmatrixmethode" (Beschichtung, Referenzproben für die zu messende Probe und enzymatische Antikörper mit unterschiedlichen Verdünnungsgraden).

　　

4. Auswahl des Enzymsubstrats und des Wasserstoffspenders: Die Auswahl des Wasserstoffspenders erfordert eine billige, sichere, offensichtliche und farblose Reaktion. Einige Wasserstoffversorgungsmittel (wie OPD usw.) haben eine potenziell krebserregende Wirkung und sollten geschützt werden. Wenn die Bedingungen es zulassen, sollten nicht krebserregende und hochempfindliche Wasserstoffversorgungsmittel wie TMB und ABTS verwendet werden, die derzeit eine zufriedenstellende Wasserstoffversorgung sind. Nach einer Weile der Substrateinwirkung sollte eine starke Säure oder eine starke Alkali hinzugefügt werden, um die Reaktion zu beenden. Die allgemeine Substrateinwirkungszeit sollte 10-30 Minuten betragen. Die Substratlösung muss frisch hergestellt werden, insbesondere mit H2O2 vor der Verwendung.