Die Qualität der Zellproben hängt direkt von der Zuverlässigkeit und Wiederholbarkeit der Ergebnisse ab. Koburi Bio Shanghai wird Ihnen systematisch die Kernpunkte der Vorbereitung und Erhaltung von Zellproben vorstellen und Forschern eine standardisierte Referenz für den Betrieb zur Verfügung stellen, um sicherzustellen, dass Zellproben im maximalen Zustand erhalten werden und ihre biologischen Eigenschaften und ihren experimentellen Wert erhalten.
Schlüsselstufe der Zellprobenverbereitung
1. Vorbereitung
Definition des Experiments: Bestimmung des Präparationsprogramms basierend auf den nachfolgenden Experimentzwecken (z. B. Proteomik, Transkriptomik, Zellkultur usw.)
- Vorbereitung von Reagenzien und Verbrauchsmaterialien: Alle Reagenzien und Verbrauchsmaterialien, die mit den Zellen in Kontakt kommen, müssen steril und frei von Nuklease- / Protease-Kontamination sein
- Vorkühlung der Anlage: Zentrifugerrotoren, Gefrierrohre usw. werden auf die richtige Temperatur vorgekühlt
2. Sammlung und Verarbeitung von Zellen
- Bestätigung des Zellstands: Stellen Sie sicher, dass sich die Zellen in der Logarithmus-Wachstumsphase befinden und die lebende Zellrate > 95%
- Schone Behandlung: Vermeiden Sie starke Schläge und waschen Sie mit vorgekühltem PBS oder physiologischem Salzwasser
- rechtzeitige Behandlung: so schnell wie möglich nach dem Entfernen aus dem Kühlraum zu verarbeiten, um die zelluläre Stressreaktion zu reduzieren
3. Besondere Verarbeitungsanforderungen
- Proteinanalyseprobe: Hinzufügen einer Protease-Inhibitor-Mischung, um wiederholtes Gefrierschmelzen zu vermeiden
Nukleinsäureanalyseprobe: RNA-Schutzmittel mit RNase-/DNase-freiem Verbrauchsmaterial
- Metabolomische Probe: Schnelle Löschung der Stoffwechselaktivität mit vorgekühltem Methanol oder spezieller Löschflüssigkeit
Methoden und Auswahl der Zellhaltung
Kurzfristige Aufbewahrung (< 24 Stunden)
- 4 ° C Aufbewahrung: Suspendiert in einem fertigen Quan-Medium oder Puffer
- Anwendungsbereich: Stromzytologie, Live Cell Imaging und andere Experimente am Tag
- Achtung: Vermeiden Sie bakterielle Verschmutzung, versiegelt aufbewahren
Mittelfristige Aufbewahrung (1 Woche - 1 Monat)
-80 ° C Aufbewahrung: Hinzufügen eines geeigneten Gefrierschutzmittels
Empfohlene Gefriermittel:
Zellkultur: Rinderserum mit 10% DMSO
- Proteinanalyse: Lysate mit Protease-Inhibitoren
Nukleinsäureanalyse: RNA-Schutzmittel (wie TRIzol oder spezielle Konservierungsflüssigkeiten)
Langfristige Aufbewahrung (> 1 Monat)
- Flüssiger Stickstoff Aufbewahrung (-196 ° C): Zellaktivität aufrechterhalten die jia Methode
- Einfrierverfahren:
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1. Abkühlung des Verfahrens: 4 ° C 30 Minuten → -20 ° C 2 Stunden → -80 ° C Übernachtung
2. Langfristige Aufbewahrung in flüssiger Stickstoffphase (-150 ° C)
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- Auswahl der Gefrierrohre: Kennzeichnung der Zellinformationen, Datum der Gefrierung, Anzahl der Übertragungen, Betreiber
3. Qualitätskontrollpunkte
1. Testen der Zellaktivität
- Taipanblaue Färbung oder MTT-Test vor und nach dem Gefrieren
Die Aktivität der Zellen nach der Erholung sollte > 80% (idealerweise > 90%).
2. Verschmutzungskontrolle
- Regelmäßige Erkennung von Branchenverschmutzung
- Beobachtung und Spiegelinspektion von Bakterien und Pilzen
- Zellkreuzvereinigung STR Identifizierung
3. Kennzeichnung und Aufzeichnung
- 2D-Code- oder Barcode-Management-System
- Detaillierte Aufzeichnung der Zellenquelle, der Prozess, der Speicherort
4. Lösungen für häufige Probleme
| Probleme | Mögliche Ursachen | Lösungen |
| Niedrige Zellaktivität nach der Erholung | Einfrierprozess kühlt zu schnell | Verwenden des Programms Kühlbox |
| Proteinbebau | Mangel an Protease-Inhibitoren | Zugabe einer Mischung aus mehreren Protease-Inhibitoren |
| RNA-Abbau | RNase-Kontamination während des Betriebs | Schnelle Verarbeitung mit RNase-freien Verbrauchsmaterialien |
| Bronchogen-Kontamination | Original-Zellen- oder Betriebsverkontamination | Regelmäßige Erkennung mit Bronchogen-Entfernungsmitteln |
V. Sicherheitsmaßnahmen
1. Biosicherheit: Einhaltung der entsprechenden Anforderungen an die Biosicherheitsklasse entsprechend der Zellquelle
2. Flüssiger Stickstoff: Tragen Sie Schutzmasken und Handschuhe, um Gefriere zu verhindern
Chemische Sicherheit: Reagenzien wie DMSO werden richtig behandelt, um direkten Kontakt mit der Haut zu vermeiden
4. Abfallbehandlung: Zellabfälle werden nach dem Prozess der Behandlung von biologisch gefährlichen Materialien behandelt
Zusammenfassung der empfohlenen Aufbewahrungsprogramme
| Anwendungsrichtung | Empfohlene Aufbewahrungsmethoden | Aufbewahrungstemperatur | Erwartete Aufbewahrungszeit |
| Zellresultationskultur | DMSO+ Serumgefrierung | Flüssiger Stickstoff | über 10 Jahre |
| Western Blot | RIPA-Lösung | -80 °C | 1 Jahr |
| RNA-Extraktion | TRIzol oder RNA-Schutzmittel | -80 °C | 6 Monate |
| Metabolik | 80% Methanol ausgeschaltet | -80 °C | 3 Monate |
| Flow-Zytologie | PBS mit 2% FBS | 4 °C | 24 Stunden |
7. Intelligentes Managementsystem
Es wird empfohlen, dass das Labor ein elektronisches Zellprobenmanagementsystem erstellt, das Folgendes enthält:
- Echtzeit-Nachverfolgung der Probenposition
- Einfrieren / Entfernen von Aufzeichnungen automatisch aktualisiert
- Regelmäßige Bestandsprüfungen und Erinnerungen
- Schnelle Abholung von Probeninformationen

Qualitativ hochwertige Zellproben sind der Grundstein für den Erfolg des Experiments. Durch standardisierte Vorbereitungsverfahren und wissenschaftliche Konservierungsmethoden kann die biologische Integrität der Zellproben auf ein Minimum gehalten werden. Mit der Entwicklung neuer Technologien wie der Einzelzellanalyse und der räumlichen Transkriptomik werden die Anforderungen an die Qualität der Zellproben weiter erhöht. Die Festlegung strenger Probenmanagementspezifikationen ist nicht nur eine Notwendigkeit, um die Zuverlässigkeit der aktuellen Experimente zu gewährleisten, sondern auch eine strategische Investition in die Erhaltung wertvoller biologischer Ressourcen für zukünftige Forschung.