5637 Blasenkrebszellen

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Zellstamm/Stamm:

1. Zelllinie (Cell Line): Die erfolgreiche Übertragung der ursprünglichen Kultur ist eine Zelllinie, die aus der ursprünglich in der ursprünglichen Kultur vorhandenen Zelllinie (Lineage of Cells) besteht.

2. Zellstamm (Cell Strain): durch Selektion oder Klonbildung aus einer ursprünglichen Kultur oder Zelllinie mit speziellen Eigenschaften oder Markern erhalten, die als Zellstamm bezeichnet werden. Besondere Eigenschaften oder Merkmale des Zellstamms müssen während der gesamten Kultivperiode stets vorhanden sein. Wenn die Übertragung nicht fortgesetzt oder eine begrenzte Anzahl von Übertragungen besteht, wird dies als finiter Zellstamm bezeichnet. Wenn es sich um eine kontinuierliche Übertragung handelt, wird dies als kontinuierlicher Zellstamm bezeichnet. Für menschliche Tumorzellen, die in vitro für mehr als ein halbes Jahr kultiviert werden, ist das Wachstum stabil und die kontinuierliche Übertragung als kontinuierlicher Stamm oder Linie bezeichnet werden kann.

a) Erste Erziehung

Die primäre Kultur, auch als primäre Kultur bezeichnet, ist die erste Kultur, die Zellen, Gewebe und Organe direkt aus dem Körper entnommen wird. Sobald die Zellen eine Subkultur durchgeführt haben, werden sie nicht mehr als Primärkultur bezeichnet, sondern als Zelllinie.

2) Zellen

Die ursprüngliche Kultur beginnt die erste Übertragung von Zellen nach der Kultur, die als Zelllinie bezeichnet werden. Wenn die Überlebensdauer einer Zelllinie begrenzt ist, wird diese als Endzelllinie bezeichnet. Eine Zelllinie, die eine unbegrenzte Fortpflanzungsfähigkeit erlangt hat, wird als kontinuierliche Zelllinie oder Infinite Cell Line bezeichnet. Die meisten unendlichen Zelllinien haben sich heterotrope Nukleotype entwickelt, einige können zu bösartigen Zellen geworden sein und sind daher im Wesentlichen bereits eine Zelllinie, die sich transformiert hat. Unendliche Zelllinien sind nur ewig lebendig (oder nicht sterblich), behalten jedoch die Kontakthemmung und keine Krebserzeugung durch heterogene Impfungen; Einige haben nicht nur ewiges Leben, die exotische Impfung ist auch tumorogene, was bedeutet, dass sie sich maligniert hat. Diese beiden unendlichen Zelllinien mit unterschiedlichen Eigenschaften sind in der inländischen und ausländischen Literatur oft nicht sehr streng bei der Anwendung dieser Begriffe. Für die konzeptuelle Klarheit, dieses Buch auf bösartige unendliche Zelllinien verwendet! ° bösartige Transformation Zelllinien! Das Wort könnte besser sein. Für solche Zelllinien, die nur ewig und nicht bösartig sind, können Sie eine unendliche Zelllinie oder eine Transformationszelllinie verwenden. Die derzeit verbreiteten NIH3T3, Rat-1 und 10T1/2 gehören zu diesen Zelllinien.

Zellkultur Operationen:

1) Erholung der Zellen: Schütteln Sie das Gefrierrohr, das 1 ml Zellsuspension enthält, schnell in einem 37 ° C Wasserbad aufzufrieren und mischen Sie gleichmäßig mit 4 ml Medium. 3 min bei 1.000 U/min zentrifugieren, die Oberflüssigkeit entfernen und 1-2 ml Medium hinzufügen. Fügen Sie dann alle Zellsuspension in eine Flasche mit einer moderaten Menge an Medium, um über Nacht zu kultivieren (oder fügen Sie die Zellsuspension in eine 6 cm Scheibe mit ca. 4 ml Medium, um über Nacht zu kultivieren). Am nächsten Tag wechseln und die Zelldichte prüfen.

2) Zelltransplantation: Wenn die Zelldichte 80% -90% beträgt, kann eine Zelltransplantation durchgeführt werden. a、 Entfernen Sie die Kultur und waschen Sie die Zellen 1-2 mal mit PBS ohne Kalzium- und Magnesiumionen.

b、 Fügen Sie 1 ml Verdauungsflüssigkeit (0,25% Trypsin-0,53 mM EDTA) in die Flasche, damit die Verdauungsflüssigkeit alle Zellen durchdringt, entfernen Sie die Verdauungsflüssigkeit, legen Sie die Flasche in einem 37 ° C-Koffer, um 1 -3 min (je nach Zellverau) zu verdauen, und beobachten Sie dann die Zellverau unter dem Mikroskop, wenn die meisten Zellen sich runden und ausfallen, nehmen Sie schnell zurück zum Arbeitstisch, klicken Sie auf die Flasche und fügen Sie 2-3 ml Medium hinzu, um die Verdauung zu beenden. Nach einem leichten Schlag in ein steriles Zentrifugerrohr eingeladen, 1.000 U/min 5 min zentrifugieren, die Oberflüssigkeit entfernen und 1-2 ml Kulturflüssigkeit hinzufügen, um gut zu blasen. .

c、 Die Zellsuspension wird in einem Verhältnis von 1:2 in eine neue Schale oder Flasche mit 8 ml Medium aufgeteilt und in eine Kulturkammer kultiviert.

3) Zellfrieren: Wenn der Zellwachstumszustand gut ist, können Zellen gefriert werden. Ein Beispiel für die Flasche T25:

a、 Sammeln Sie die Zellen, laden Sie sie in sterile Zentrifugerrohre, zentrifugieren Sie 4 min unter 1000 U/min, entfernen Sie die Oberflüssigkeit, waschen Sie sie wieder mit PBS und entfernen Sie PBS für die Zellzählung.

b、 Abhängig von der Anzahl der Zellen fügen Sie eine serolose Zellfrierflüssigkeit hinzu, so dass die Zelldichte 5 × 106 ~ 1 × 107 / ml ist, mischen Sie sanft, und 1 ml Zellsuspension pro Gefrierrohr gefriert wird, achten Sie darauf, dass das Gefrierrohr gut gekennzeichnet ist.

c、 Füllen Sie das Gefrierrohr in einen -80 ° C Kühlschrank und nach 24 h in flüssigen Stickstoff-Bewässerung speichern. Aufzeichnen Sie die Position des Gefrierrohres für das nächste Mal.

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