Keine Sorgen nach dem Verkauf Blastenproteinase 14 (CASP14) menschliche Reagenz Kit

Sorgen nach dem Verkauf Blasenproteinase 14 (CASP14) menschliches Reagenzgerät
Einführung
Blastenproteinase 14 (CASP14) ist ein Enzym, das durch das CASP14-Gen kodiert wird. Dieses Gen ist ein Mitglied der Caspase-Familie. In der Ausführungsphase der Apoptose spielt die sequenzielle Aktivierung der Caspase eine zentrale Rolle. Caspasen sind in Form von inaktiven Protonasen vorhanden und werden auf konservierten Asparaginresten durch den Proteinbau verarbeitet, um zwei Untereinheiten, große und kleine, zu erzeugen, die aktive Enzyme bilden. Diese Caspase wurde nachgewiesen, in vitro durch Caspase 8 und Caspase 10 behandelt und aktiviert und in vivo durch Anti-Fas-Agitator-Antikörper oder TNF-assoziierte Apoptose-induzierte Ligande. Seine Expression und Behandlung können an der terminalen Differenzierung der Hortazellen beteiligt sein, die für die Bildung der Hautbarriere wichtig ist. Das menschliche CASP14-Immunoassay in diesem Kit ist eine dreistufige Festphase-Klempf-ELISA zur Messung des menschlichen CASP14 in Zellkulturen, Serum und Plasma. Das Kit enthält E. coli Expression recombinant human CASP14 und Antikörper gegen recombinant Protein produziert. Die Ergebnisse, die mit natürlichen menschlichen CASP14 erhalten wurden, zeigen eine lineare Kurve, die parallel zu den Standardkurven ist, die mit rekonstruierten Normen erhalten wurden. Diese Ergebnisse deuten darauf hin, dass das Kit zur Bestimmung der relativen Massenwerte von CASP14 bei natürlichen Menschen verwendet werden kann.

Prüfprinzip

Kit mit dualer Antikörper-KlemmmethodeELISA-Technologie: Die Erfassung von Antikörpern Paket auf die Enzym-Markierungsplatte, die Erfassung von Proben und Standardprodukte in der Testsubstanz CASP14, nach der Inkubation reinigen, dann die markierte Detektion von Antikörpern für die Inkubation nach der Reinigung, die Bildung des "Erfassung von Antikörpern-Antigen-Detektion von Antikörpern" Immunkomplex, anschließend die Kettenmoulphinin gekoppelte Moringa-Peroxidase zur Inkubation hinzufügen, nach der Inkubation reinigen, dann nach dem Zugabe von TMB-Palette, wenn die Probe der Testsubstanz blau ist, dann fügen Sie die Termination zur Reaktion zu stoppen. Die freien Bestandteile wurden während des Tests abgewascht, der OD-Wert wurde mit einem Enzym-Skalierer bei 450 nm gemessen, die Farbe war positiv proportional zum Gehalt des zu messenden Stoffes in der Probe, und die Konzentration von CASP14 in der Probe wurde durch die Zeichnung einer Standardkurve berechnet.

Betriebspunkte

1. Bei der Mischung von Proteinlösungen sollte immer Schaum vermieden werden. Um eine Kreuzkontamination zu vermeiden, sollte der Pipettenkopf bei jedem Zusatz von Standardprodukten, Proben und Reagenzien ausgetauscht werden. Darüber hinaus sollte jedes Reagenz separat in einem Behälter verwendet werden.

2. Stellen Sie sicher, dass das Reagenz ununterbrochen in die Plattenlöcher hinzugefügt wird. Um genaue Ergebnisse zu gewährleisten, ist eine gute Dichtungsfilm während des Inkubationsschritts erforderlich.

3. Wenn Sie eine automatische Plattenwaschmaschine verwenden, können Sie die Messgenauigkeit verbessern, indem Sie eine Einweichzeit von 30 Sekunden nach dem Zugabe des Waschpuffers hinzufügen oder die Platte um 180 Grad zwischen den Waschstufen drehen.

4. Das Farbstoff sollte farblos bleiben, bis es der Platte hinzugefügt wird. Stellen Sie sicher, dass das Farbmittel nicht durch Licht ausgesetzt ist. Das Farbstoff sollte von farblos auf blau wechseln.

5. Die Endflüssigkeit sollte in der gleichen Reihenfolge wie das Farbstoff zur Platte hinzugefügt werden. Nach Zugabe der Endflüssigkeit wird die in den Löchern gebildete Farbe von blau zu gelb. Grüne Löcher zeigen, dass die Endlösung nicht ausreichend mit der Matrixlösung gemischt ist.

Weitere benötigte Materialien

1. Enzym-Calibrator, der 450 nm Messwellenlänge enthält und 600-680 nm Korrekturwellenlänge besser enthält;

2. Pipetten und Pistolenkopfe;

destilliertes oder deionisiertes Wasser;

4. 100-1000 mL Messflasche;

5. Waschmaschine für Flaschen, Pistolen oder automatische Mikroporenplatten;

6. Horizontale Umlaufbahn Mikroporen Platte Oszillator, in der Lage, eine Geschwindigkeit von 500 ± 50 rpm zu halten;

7. Versuchsrohre zum Verdünnen von Standardprodukten und Proben.

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Hinweise

1. Die in diesem Kit bereitgestellte Endflüssigkeit ist eine verdünnte Schwefelsäureleisung mit einer gewissen Korrosionsfähigkeit, die vorsichtig zu bedienen ist.

Einige Inhaltsstoffe in diesem Kit enthalten Konservierungsmittel, die allergische Hautreaktionen verursachen können, und eine Maske sollte getragen werden, um Nebel zu vermeiden.

3. Farbstoff B kann Haut, Augen und Atemwege reizen und sollte eine Maske tragen, um Nebel zu vermeiden.

4. Tragen Sie Schutzhandschuhe, Augen- und Gesichtsschutzmaterialien und waschen Sie sich nach der Behandlung die Hände.

Reagenzbereitung

1. Alle Reagenzien für etwa 30 Minuten vor der Verwendung auf Raumtemperatur stellen.

2. Konfiguration der Waschflüssigkeit / Verdünnung: Wenn die Waschflüssigkeit / Verdünnung (20 x) einen Kristall ausfällt, muss sie auf 37 ° C erhitzt werden, bis der Kristall vollständig gelöst ist. Mit destilliertem Wasser 1:20 verdünnen (z.B. 1 ml konzentriertes Waschmittel mit 19 ml destilliertem Wasser)

Standardkonfiguration

Standardprodukte aus dem Kit herausnehmen, vorbereiten7 Prüfrohre, zuerst400 ng / mlStandardprodukte (200 μL) nach Bedarf eine gewisse Menge mit 1 x Verdünnung verdünnen auf 20ng / ml (z.B.: 50 μL Standard-Mutter + 950 μL 1 x Verdünnung, die Herstellung von 1000 μL 20 ng / ml Konzentration Standard Produkt), dann in 6 Röhren jeweils 500 μL 1 x Verdünnung hinzufügen, in den 6 einzelnen Röhren 20ng / ml Standard Produkt in der Folge zweimal verdünnt auf 6 Gradienten, zusammen 7 Konzentrationen Standard Produkt, in der Folge:20% von / ml, 10% von / ml, 5% von / ml, 2,5 ng / ml, 1,25 ng / ml, 0,625 ng / ml,Absorbiert aus der Konzentrationsstandardlösung500 μL Standardprodukt in das nächste Röhrchen, sanft geblasen und vermischt, so dass die Verdünnung des Standardprodukts (wie in der Abbildung gezeigt) und so weiter durchgeführt wird, 1 x Verdünnung als Nullkonzentration Standardprodukt (0ng / mL)

Berechnung der Ergebnisse

Berechnen Sie den Durchschnitt der Standards- und ProbenkomponentenDer OD-Wert wird als Korrekturwert von dem leeren Loch abgezogen. Verwenden Sie die Konzentration als horizontale Koordinate und den OD-Wert als longitudinale Koordinate, zeichnen Sie eine Standardkurve für eine vierparametrische logische Funktion auf Koordinatenpapier (die Werte der leeren Gruppen werden bei der Darstellung entfernt) oder erstellen Sie eine Standardkurve mit Computersoftware, die eine vierparametrische logische (4-P)-Kurvenpassung generiert. Ist der OD-Wert der Probe höher als die Obergrenze der Standardkurve, so wird nach entsprechender Verdünnung erneut gemessen und bei der Berechnung der Probenkonzentration mit dem entsprechenden Verdünnungsvermöglichten multipliziert..

Beispieldaten

Die folgenden Daten und Kurven dienen nur zur Referenz und der Experimentierende muss Standardkurven auf der Grundlage seiner eigenen experimentellen Daten erstellen.

Die in dieser Abbildung dargestellten Standardkurven dienen nur als Beispiele. Die Ergebnisberechnung erfolgt anhand der Standardkurven, die auf dem gleichen Teststandard gezeichnet wurden.
Empfindlichkeit

Nach Probentest ist die Empfindlichkeit dieses Kitsvon 0,16 ng/ml.

Spezifische

Die Kit-Messung erkennt natürliche und rekombinante MenschenCASP14.

Andere verwandte Proteine werden in einem verdünnten Puffer hergestellt als50ng/mL， Kreuzreaktivität bestimmen. Es wurden keine offensichtlichen Kreuzreaktionen beobachtet.

Zusammenfassung der experimentellen Schritte
1. Standardprodukte und Proben hinzufügen, 37 ° C Lichtschutzreaktion 1,5 h, 3 Mal waschen.

2. Testen Sie Antikörper,37 ° C Lichtschutzreaktion 1 h, 4 Mal waschen.

3. enzymatische Verbindungen,Die Lichtschutzreaktion bei 37 ° C dauert 30 Minuten und wird 4 Mal gewaschen.

4. Fügen Sie die Farbflüssigkeit, 37 ° C Lichtschutzreaktion für 15 Minuten.

5. Die Endflüssigkeit hinzufügen und in 5 Minuten lesen

MenschBlasenproteinase14(CASP14)Kit zur quantitativen Untersuchung von Zellkulturen in Serum, Serum und PlasmaCASP14Bevor Sie dieses Produkt verwenden, müssen Sie diese Anleitung vollständig lesen.Menschen.ELISA-Kits sind ausschließlich für wissenschaftliche Zwecke bestimmt und können nicht für andere Diagnosen verwendet werden..