Service Support Blastenproteinase 3 (CASP3) menschliche Reagenz Kit

Service-Unterstützung Blasenproteinase 3 (CASP3) menschliches Reagenzgerät
Einführung
Caspase-3 ist ein Protein, das mit Caspase-8 und Caspase-9 interagiert. Es wird durch das CASP3-Gen kodiert. Homologe von CASP3 wurden bei vielen Säugetieren mit vollständigen Genomdaten gefunden. Das CASP3-Protein gehört zur Caspase-Familie. Die sequenzielle Aktivierung von Caspasen spielt eine zentrale Rolle in der Ausführungsphase der Apoptose. Es ist in Form eines inaktiven Protonases vorhanden, das durch die Proteinhydrolyse konservierter Asparaginsäurereste zwei Untereinheiten, große und kleine, zur Bildung eines aktiven Enzyms bildet. Das Protein spaltet und aktiviert Caspasen 6 und 7; Das Protein selbst wird von Caspasen 8, 9 und 10 verarbeitet und aktiviert. Es ist die wichtigste Caspase, die am Abbau des Amyloid-β-4A-Vorläuferproteins beteiligt ist. Das humane CASP3-Immunoassay in diesem Kit ist eine dreistufige Festphase-Klempf-ELISA zur Messung des menschlichen CASP3 in Zellkulturen, Serum und Plasma. Das Kit enthält E. coli Expression recombinant human CASP3 und Antikörper gegen recombinante Proteine. Die Ergebnisse, die mit dem natürlichen menschlichen CASP3 erhalten wurden, zeigen eine lineare Kurve, die parallel zu der Standardkurve ist, die mit dem rekonstruierten Standard erhalten wurde. Diese Ergebnisse deuten darauf hin, dass das Kit zur Bestimmung der relativen Massenwerte von CASP3 für natürliche Menschen verwendet werden kann.

Prüfprinzip

Kit mit dualer Antikörper-KlemmmethodeELISA-Technologie: Die Erfassung von Antikörpern Paket auf die Enzym-Markierungsplatte, die Erfassung der Probe und Standardprodukte in der zu testenden CASP3, nach der Inkubation reinigen, dann die markierten Detektion Antikörper für die Inkubation nach der Reinigung hinzufügen, um den "Erfassung von Antikörper-Antigen-Detektion Antikörper" Immunkomplex zu bilden, anschließend die Kettenmoulphinin gekoppelte Moringa-Peroxidase zur Inkubation hinzufügen, nach der Inkubation reinigen, dann nach dem Zugabe von TMB-Palette, wenn die Probe in der zu testenden Substanz blau ist, dann fügen Sie die Termination zur Reaktion zu stoppen. Die freien Bestandteile wurden während der Prüfung abgewascht, der OD-Wert wurde mit einem Enzym-Skalierer bei 450 nm gemessen, die Farbe war positiv proportional zum Gehalt des zu messenden Stoffes in der Probe, und die Konzentration von CASP3 in der Probe wurde durch die Zeichnung einer Standardkurve berechnet.

Betriebspunkte

1. Bei der Mischung von Proteinlösungen sollte immer Schaum vermieden werden. Um eine Kreuzkontamination zu vermeiden, sollte der Pipettenkopf bei jedem Zusatz von Standardprodukten, Proben und Reagenzien ausgetauscht werden. Darüber hinaus sollte jedes Reagenz separat in einem Behälter verwendet werden.

2. Stellen Sie sicher, dass das Reagenz ununterbrochen in die Plattenlöcher hinzugefügt wird. Um genaue Ergebnisse zu gewährleisten, ist eine gute Dichtungsfilm während des Inkubationsschritts erforderlich.

3. Wenn Sie eine automatische Plattenwaschmaschine verwenden, können Sie die Messgenauigkeit verbessern, indem Sie eine Einweichzeit von 30 Sekunden nach dem Zugabe des Waschpuffers hinzufügen oder die Platte um 180 Grad zwischen den Waschstufen drehen.

4. Das Farbstoff sollte farblos bleiben, bis es der Platte hinzugefügt wird. Stellen Sie sicher, dass das Farbmittel nicht durch Licht ausgesetzt ist. Das Farbstoff sollte von farblos auf blau wechseln.

5. Die Endflüssigkeit sollte in der gleichen Reihenfolge wie das Farbstoff zur Platte hinzugefügt werden. Nach Zugabe der Endflüssigkeit wird die in den Löchern gebildete Farbe von blau zu gelb. Grüne Löcher zeigen, dass die Endlösung nicht ausreichend mit der Matrixlösung gemischt ist.

Weitere benötigte Materialien

1. Enzym-Calibrator, der 450 nm Messwellenlänge enthält und 600-680 nm Korrekturwellenlänge besser enthält;

2. Pipetten und Pistolenkopfe;

destilliertes oder deionisiertes Wasser;

4. 100-1000 mL Messflasche;

5. Waschmaschine für Flaschen, Pistolen oder automatische Mikroporenplatten;

6. Horizontale Umlaufbahn Mikroporen Platte Oszillator, in der Lage, eine Geschwindigkeit von 500 ± 50 rpm zu halten;

7. Versuchsrohre zum Verdünnen von Standardprodukten und Proben.

Service-Unterstützung Blasenproteinase3 (CASP3) menschliches Reagenzgerät
Hinweise

1. Die in diesem Kit bereitgestellte Endflüssigkeit ist eine verdünnte Schwefelsäureleisung mit einer gewissen Korrosionsfähigkeit, die vorsichtig zu bedienen ist.

Einige Inhaltsstoffe in diesem Kit enthalten Konservierungsmittel, die allergische Hautreaktionen verursachen können, und eine Maske sollte getragen werden, um Nebel zu vermeiden.

3. Farbstoff B kann Haut, Augen und Atemwege reizen und sollte eine Maske tragen, um Nebel zu vermeiden.

4. Tragen Sie Schutzhandschuhe, Augen- und Gesichtsschutzmaterialien und waschen Sie sich nach der Behandlung die Hände.

Reagenzbereitung

1. Alle Reagenzien für etwa 30 Minuten vor der Verwendung auf Raumtemperatur stellen.

2. Konfiguration der Waschflüssigkeit / Verdünnung: Wenn die Waschflüssigkeit / Verdünnung (20 x) einen Kristall ausfällt, muss sie auf 37 ° C erhitzt werden, bis der Kristall vollständig gelöst ist. Mit destilliertem Wasser 1:20 verdünnen (z.B. 1 ml konzentriertes Waschmittel mit 19 ml destilliertem Wasser)

Standardkonfiguration

Standardprodukte aus dem Kit herausnehmen, vorbereiten7 Prüfrohre, zuerst200 ng / mlStandardprodukte (200 μL) nach Bedarf eine gewisse Menge mit 1 x Verdünnung verdünnen auf 10ng / ml (z.B.: 50 μL Standard-Mutter + 950 μL 1 x Verdünnung, die Herstellung von 1000 μL 10ng / ml Konzentration Standardprodukt), dann in 6 Röhrchen jeweils 500 μL 1 x Verdünnung hinzufügen, in den 6 einzelnen Röhrchen 10ng / ml Standardprodukt in der Folge zweimal verdünnt auf 6 Gradienten, zusammen 7 Konzentrationen Standardprodukt, in der Folge:10% von / ml, 5% von / ml, 2,5% von / ml, 1,25 ng / ml, 0,625 ng / ml, 0,313 ng / ml,Aus der höchsten Konzentration der Standardlösung500 μL Standardprodukt in das nächste Röhrchen, sanft geblasen und vermischt, so dass die Verdünnung des Standardprodukts (wie in der Abbildung gezeigt) und so weiter durchgeführt wird, 1 x Verdünnung als Nullkonzentration Standardprodukt (0ng / mL)

Berechnung der Ergebnisse

Berechnen Sie den Durchschnitt der Standards- und ProbenkomponentenDer OD-Wert wird als Korrekturwert von dem leeren Loch abgezogen. Verwenden Sie die Konzentration als horizontale Koordinate und den OD-Wert als longitudinale Koordinate, zeichnen Sie eine Standardkurve für eine vierparametrische logische Funktion auf Koordinatenpapier (die Werte der leeren Gruppen werden bei der Darstellung entfernt) oder erstellen Sie eine Standardkurve mit Computersoftware, die eine vierparametrische logische (4-P)-Kurvenpassung generiert. Ist der OD-Wert der Probe höher als die Obergrenze der Standardkurve, so wird nach entsprechender Verdünnung erneut gemessen und bei der Berechnung der Probenkonzentration mit dem entsprechenden Verdünnungsvermöglichten multipliziert..

Beispieldaten

Die folgenden Daten und Kurven dienen nur zur Referenz und der Experimentierende muss Standardkurven auf der Grundlage seiner eigenen experimentellen Daten erstellen.

Die in dieser Abbildung dargestellten Standardkurven dienen nur als Beispiele. Die Ergebnisberechnung erfolgt anhand der Standardkurven, die auf dem gleichen Teststandard gezeichnet wurden.
Empfindlichkeit

Nach Probentest ist die Empfindlichkeit dieses Kitsvon 0,08 ng/ml.

Spezifische

Die Kit-Messung erkennt natürliche und rekombinante MenschenCASP3.

Andere verwandte Proteine werden in einem verdünnten Puffer hergestellt als50ng/mL， Kreuzreaktivität bestimmen. Es wurden keine offensichtlichen Kreuzreaktionen beobachtet.

Zusammenfassung der experimentellen Schritte
1. Standardprodukte und Proben hinzufügen, 37 ° C Lichtschutzreaktion 1,5 h, 3 Mal waschen.

2. Testen Sie Antikörper,37 ° C Lichtschutzreaktion 1 h, 4 Mal waschen.

3. enzymatische Verbindungen,Die Lichtschutzreaktion bei 37 ° C dauert 30 Minuten und wird 4 Mal gewaschen.

4. Fügen Sie die Farbflüssigkeit, 37 ° C Lichtschutzreaktion für 15 Minuten.

5. Die Endflüssigkeit hinzufügen und in 5 Minuten lesen

MenschBlasenproteinase3(CASP3)Kit zur quantitativen Untersuchung von Zellkulturen in Serum, Serum und PlasmaCASP3Bevor Sie dieses Produkt verwenden, müssen Sie diese Anleitung vollständig lesen.Menschen.ELISA-Kits sind ausschließlich für wissenschaftliche Zwecke bestimmt und können nicht für andere Diagnosen verwendet werden..