Normalerweise können wirELISAEs gibt verschiedene Arten von Proben, wie Serum, Plasma, Urin, Zellkultur-Serum oder Gewebe-Homogene-Plasma usw., verschiedene Arten von Prüfproben vor der Behandlung ist anders. Die richtige Behandlung der Probe ist garantiertELISA* Schritt zur Prüfung der Genauigkeit und Genauigkeit, unten eine kurze Beschreibung der Behandlungsmethoden für verschiedene Arten von Proben.

1、 Serum

Serum ist Zui häufig verwendetELISAEine Probe zu prüfen, die Verarbeitung ist auch relativ einfach.

Abnahme von Blutproben mit thermogen- und endotoxinfreien Proben oder Zentrifugen und Platzierung der Proben oder Zentrifugen bei Raumtemperatur2Stunden oder4Über Nacht bei ℃ das Serum auslösen lassen. (Die Prüfröhre oder die Zentrifugerröhre werden geneigt platziert, um den Flüssigkeitsquerschnitt zu vergrößern und das Serum zu vergrößern.)4℃1000×gZentrifugieren20MinuteAufmerksam sammeln. Es wird empfohlen, das Serum in mehrere Portionen aufzuteilen.-20C oder-80℃ aufbewahren, um wiederholtes Einfrieren zu vermeiden.

Bei der Blutentnahme sollte die Blütolyse vermieden werden, da bei der Spaltung der roten Blutkörperchen Substanzen mit Peroxidase-Aktivität freigesetzt werden.HRPFür die MarkierungELISAEs kann eine unspezifische Farbdesignation bei der Detektion geben, die zu einer Ungenauigkeit der Detektion führt. Bakterielle Verschmutzung sollte ebenfalls vermieden werden, da Bakterien endogeneHRPDies führt zu einem falschen positiven Test.

2、 Blutplasma

Abnahme von Blutproben mit Antikoagulanten oder Zentrifugen nach Abnahme30 Minuteninnen4℃ 1000×gZentrifugieren15 MinutenNehmen Sie das Plasma sofort ab. Mehrere Teile verteilen,-20C oder-80℃ aufbewahren, um wiederholtes Einfrieren zu vermeiden. Vermeiden Sie die Verwendung von Blutlose oder hyperlipidische Proben.

Die häufig verwendeten Antikoagulante sindEDTANatriumhepatin und Natriumcitrat usw. sollten bei der Prüfung auch die Anleitung der Kit sorgfältig gelesen werden, um zu überprüfen, ob die Kit spezielle Anforderungen an Kogulante hat.

3、 Zellkultur

Nehmen Sie die Zellkultur auf das Zentrifugerrohr,1000×gZentrifugieren20 MinutenEntfernen Sie Zellstrücke und Verunreinigungen,-20C oder-80℃ aufbewahren, um wiederholtes Einfrieren zu vermeiden.

4、 Zellulysat

1） Absaugen Sie das Medium in der Platte, verdauen Sie die Zellen mit Pansenzymen und fügen Sie eine angemessene Menge an Medium hinzu, um die Zellen von der Platte abzublasen. Suspendierte Zellen können weggelassen werden.

2） Sammeln von Zellsuspension,1000×gZentrifugieren10 MinutenEntfernen Sie das Medium und verwenden Sie vorgekühlt.PBSspülen3Zweimal.

3） Hinzufügen einer ausreichenden Menge an VorkühlungPBSOder Zell-Lysate (mit Protease-Inhibitoren vor der Anwendung) die Zellen wieder suspendieren. Normalerweise6Die Anzahl der Zellen, die ein Loch benötigt150~250μL PBSWiedersuspendieren.

4） Proben einlegen-20C oder-80C, die Probe einfrieren lassen, die Probe bei Raumtemperatur auflösen lassen und mehrmals einfrieren lassen, damit die Zellen vollständig auflösen. Die Probe kann auch mit Ultraschall gebrochen werden, um den Zweck der Spaltung zu erreichen.

5） 4℃10000 × gZentrifugieren10 MinutenEntfernen Sie die Zellen, entfernen Sie sie,-20C oder-80℃ aufbewahren, um wiederholtes Einfrieren zu vermeiden.

5Organisieren Sie die Slurry gleichmäßig

1） Verwenden Sie GewebeprobenPBS (0,01)M, PH 7,4）Spülen Sie und waschen Sie Blut oder Verunreinigungen auf der Gewebeoberfläche ab.

2） Gewebeblöcke zu wiegen, nach der Aufzeichnung zu schneiden, sollten die gebrochenen Blöcke so klein wie möglich sein, um besser zu absorbieren

3） Gewebe in einem gewissen Verhältnis vorgekühlt hinzufügenPBS(Protease-Inhibitoren vor der Anwendung hinzugefügt) homogenisiert, wenn homogenisiert auf Eis oder in einem Eisbad. (Normalerweise nach Gewicht):PBSGröße=1:9Verhältnisse, zum Beispiel1gGewebeproben entsprechen9 mlderPBSDas spezifische Volumen kann entsprechend den Erfordernissen des Experiments angepasst werden, und die Probenkonzentration nach der Erkennung sollte mit dem entsprechenden Verdünnungsvermöglichten multipliziert werden.)

4） Absaugen Sie die Gleichmäßigkeit in das Zentrifugerrohr,4℃5000×gZentrifugieren5 ~ 10 MinutenEntfernen,-20C oder-80℃ aufbewahren, um wiederholtes Einfrieren zu vermeiden.

6、 Andere flüssige biologische Proben wie Urin, Speichel

1000×gZentrifugieren20 MinutenEntfernen kann nachgewiesen werden.

Insgesamt, weilELISANur der Gehalt an löslichen Proteinen kann nachgewiesen werden, daher sollte sichergestellt werden, dass alle Proben eine klare Flüssigkeit sind und dass Niederschlag oder Suspension zentrifugiert werden müssen.

Um die Genauigkeit der Prüfung zu gewährleisten, wird-20C oder-80Proben bei ℃1~6Tests innerhalb von Monaten;4Die bei ℃ aufbewahrten Proben sollten1Tests innerhalb der Woche.

Darüber hinaus sollte sichergestellt werden, dass die Probe nicht enthältNaN₃Weil...NaN₃unterdrückt.HRPAktivität, die zu falsch negativen Ergebnissen führt.