1. Farblose Plätze

Nachdem die Färbung beendet ist, werden keine positiven Signale in den Schnitten gesehen. Dies ist ein häufigeres Phänomen in der regelmäßigen Arbeit, es gibt zwei Möglichkeiten:

Wirklich negatives Ergebnis: Es gab keine Probleme beim gesamten Färbungsprozess, und Gewebe oder Zellen äußerten keine Antigene, die mit Antikörpern verbunden sind.

Falsches negatives Ergebnis: Das negative Ergebnis spiegelt sich nicht wahr wider. Ein falsch negatives Ergebnis kann in zwei Fälle unterteilt werden: (1) Der Schnitt enthält überhaupt kein Gewebe oder Zellen, die zu untersuchen sind. Dies geschieht entweder durch die falsche Auswahl von Scheiben, Antikörpern oder Wachsblöcken. Die richtige Scheibe zur Färbung ist eine Voraussetzung für die richtigen Ergebnisse. (2) Ein oder mehrere Teile des Färbungsprozesses sind fehlerhaft. Zum Beispiel hat das Gewebe keine Antigen-Reparatur durchgeführt, und einige Gewebe müssen eine Antigen-Reparatur durchführen, um die Antigen-Expression zu erkennen; oder Antikörper verwendet werden, die nur für Gefriergewebe verwendet werden können und nicht für Paraffinengewebe verwendet werden können; Obwohl Antikörper-Ausfall in der Theorie ein allmählicher Übergriff ist, aber gelegentlich auch plötzliche Ausfälle auftreten, Antikörper sind langfristig nicht verwendet und / oder die Gültigkeitsdauer überschritten ist die Hauptursache. Es kann auch im Färbungsprozess gesehen werden, dass ein bestimmter Abschnitt verpasst wurde, wie z. B. Vergessenheit, 2- oder 3-Anti hinzuzufügen, oder zweimal 2-Anti und 3-Anti fehlen, oder weniger Wasserstoffperoxid bei der Zubereitung von DAB. Um diesen einfachen Fehler zu vermeiden, gibt es eine einfache Methode: Am Ende der Inkubation der Tri-Tri-Tri-Tri-Tri-Tri-Tri-Tri-Tri-Tri-Tri-Tri-Tri-Tri-Tri-Tri-Tri-Tri-Tri-Tri-Tri-Tri-Tri-Tri-Tri-Tri-Tri-Tri-Tri-Tri-Tri-Tri- Wenn dies auftritt, zeigt sich, dass der Herstellungsprozess von Trianti und DAB fehlerfrei ist. Wenn diese DAB wieder auf den Schnitt tropft und kein positives Signal auftritt, muss das Problem vor der Dreifache auftreten. Wenn keine braune Reaktion auf dem Papier auftritt, ist das Problem sicherlich im Herstellungsprozess von Trianti oder DAB. Diese einfache Methode hilft uns schnell, mögliche Ursachen für Probleme zu finden.

2. „Geräusche“ Färbung

Immunhymose trifft oft außer dem normalen wahren positiven Signal auf eine abnormale Hintergrundfärbung, die als abnorme Färbung bezeichnet wird."Geräusch" Färbung. "Geräusch" Färbung ist vielfältig, die Ursachen sind vielfältig, um die Erleichterung zu erleichtern, werden sie in die folgenden zusammengefasst.

1. Vollständige Farbe

Vollständige Färbung bedeutet, dass die gesamte Scheibe alle mit Farbe gefärbt ist, die Färbungsintensität kann tief oder hell sein, kurz gesagt, ist es unklar, welches Gewebe positiv ist, welches Gewebe negativ ist. Die Gründe für dieses Phänomen sind:

（1) Überhohe Antikörper-Konzentration: Eine überhohe Antikörper-Konzentration ist eine der häufigsten Ursachen. Die Lösung besteht darin, vor jedem Einsatz eines neuen Antikörpers seine Arbeitskonzentration zu testen, um jeden Antikörper individuell zu gestalten und die ideale Arbeitskonzentration für das eigene Labor zu finden, auch wenn es sich um einen fertigen Antikörper handelt.

（2) Antikörper Inkubationszeit zu lang oder hohe Temperatur: Die Lösung besteht darin, die Betriebsprozeduren streng durchzuführen, am besten einen Zeitplan oder eine Uhr mit sich zu tragen, rechtzeitig zu warnen, um eine Verlängerung der Zeit aufgrund des Vergessens zu vermeiden. Die heute beliebte zweistufige Methode (Polymer) ist sehr empfindlich und erfordert, dass die Inkubationszeit nicht die herkömmliche 1 Stunde, sondern 30 Minuten ist, daher muss sie an die Färbungsergebnisse angepasst werden.

（3) DAB Verschlechterung und Anzeigezeit ist zu lang: DAB ist am besten, wenn es Ablagerungen gibt, die nach der Filterung wiederverwendet werden sollten. Zubereitetes DAB sollte nicht zu lange gelagert werden, da Wasserstoffperoxid ohne Enzyme auch die Wirksamkeit von DAB verringert, indem es freie Sauerstoffatome freigibt, die mit DAB reagieren, und es ist nicht wünschenswert, das ungenutzte DAB nach ein paar Tagen im Kühlschrank zu lagern. Die Darstellung von DAB wird am besten unter einem Mikroskop überwacht und die Reaktion sofort beendet, wenn das ideale Färbungsgrad erreicht wird. Dies scheint jedoch unrealistisch zu sein, wenn zu viele Folien oder eine Färbungsmaschine verwendet werden, aber zumindest einige neue oder weniger verwendete Antikörper sollten überwacht werden, um zu lange Anzeigezeiten zu vermeiden.

（4) Gewebetrocknen: nach dem Überlauf der Reparaturflüssigkeit wird die Flüssigkeit nicht rechtzeitig aufgefüllt, zu viele Scheiben gefärbt, zu langsam, Tropfen vergessen, Tropfenverlust usw. sind die Ursache des Gewebetrocknens.

（5) Scheiben sind zu lange (mehr als 24 Stunden) in Puffer oder Reparatur eingeweicht: Die Ursache ist unklar, aber das Phänomen ist vorhanden. Einige Labore lieben es, am Vortag die Scheiben zu entwachsen, um sie zu reparieren, am nächsten Tag Antikörper für die Immunhistochemische Färbung hinzufügen, wenn ein Behälter mit Scheiben und Reparaturflüssigkeit über Nacht in einem 4-Grad-Kühlschrank gelagert wird, hat kein sichtbarer Einfluss auf das Ergebnis, wenn es bei Raumtemperatur gelagert wird, insbesondere im heißen Sommer, wird eine Hintergrundfärbung auftreten, daher kann es nicht zu lange gelagert werden.

（6) Anti-Veränderung, schlechte Qualität polyklonale Antikörper: Achten Sie auf die Gültigkeitsdauer des Antikörpers, abgelaufene Antikörper entweder nicht zeigen oder Hintergrundfarbe. Es ist am besten, mit neu gekauften Antikörpern eine positive Kontrolle einzurichten und mit verwendeten Antikörpern zu vergleichen.

2. Färbung der Kanten

Eine häufige Färbung ist auch ein Phänomen, das als Randeffekt bezeichnet wird. Ursachen:

（1) Geweberand und Gläser nicht fest geklebt, das Randgewebe schwebt frei in der Flüssigkeit, jede Reinigung ist nicht einfach, um das Reagenz unter dem Gewebe zu waschen. Lösung: Herstellen Sie eine qualitativ hochwertige Folie (APES oder Polylysin), schneiden Sie möglichst dünne Gewebeschnitte, nicht dicker als 4 Mikron, die Vorbehandlung des Gewebes sollte reguliert werden, um möglichst viel Gewebe zu vermeiden.

（2) das auf dem Schnitt getropfte Reagenz bedeckt das Gewebe nicht ausreichend, das Reagenz am Rande trocknet zunächst leicht, die Konzentration ist höher als das zentrale Gewebe und führt zu einer tiefen Färbung. Lösung: Um das Gewebe vollständig zu bedecken, sollte das Reagenz 2 mm über die Geweberande hinaus liegen.

3. „Sonnenfarbe“

Es bezieht sich auf die Hälfte der Färbung des Gewebes und die Hälfte ohne Färbung, die eine klare oder weniger klare Kreuzung der beiden Färbungsergebnisse bildet. Die Ursache dafür ist, dass das Reagenz nur einen Teil des Gewebes bedeckt und nicht das gesamte. Wenn nach dem Zusatz des Reagents das Reagentium nicht streuen lassen und sich auf ein Teil des Gewebes konzentrieren. In der Regel sollte nach dem Zusatz des Reagents, genau zu sehen, ob ein Gewebe nicht durch das Reagentium beendet ist.w Vollständige Abdeckung, falls dies der Fall ist, empfiehlt es sich, das Reagenz mit Zahnstiften statt mit Saugköpfen oder Reagenzflaschenmünden abzuleiten, um das gesamte Gewebe zu bedecken. Darüber hinaus ist die Färbungsbox ungleich, die Schnitte neigen, obwohl das Reagenz am Anfang das gesamte Gewebe bedeckt hat, fließt das Reagenz später zur Seite und ein Teil des Gewebes ist nicht mit dem Reagenz bedeckt. Für solche Probleme ist es einfach zu erkennen und zu lösen, wenn man nur aufmerksam ist oder denkt.

4, Flachfarbung

Die Färbungszone in der Scheibe ist östlich und westlich verteilt, und die Gründe für dieses Problem sind:

（1) das Wasser ist nicht ausgeschöpft, wenn die Blasen lokal entstehen, um das Gewebe zu erheben, wenn das Reagenz nach der Eindringung der Färbung nicht leicht zu waschen ist, die Farbe ist zu tief. Die Lösung besteht darin, dass die Blasen in der Drift-Box zu Ende gehen sollten, die Trocknungsstelle kann nicht flach sein, sollte eine Neigung von etwa 45 Grad haben, um den Wasserstrom zu fördern und zu verdampfen.

（2) Noktose, Zellstörung nach Gewebenekrose, Enzymfreisetzung, Protein-Freisetzung, Abbau, komplexe Peptidenkettenreste (wie Fc-Segment) können mit I- oder / und II-Anti-Bindungen zur endgültigen Färbung führen. Die Lösung besteht darin, dass bei der Auswahl der Färbung von Schnitten die Auswahl von Schnitten mit mehr nekrotischem Gewebe vermieden werden sollte.

（3) Bei der Herstellung von APES-Filmen ist die Konzentration des Klebstoffs zu hoch und hinterlässt nach dem Trocknen weiße kleine Punkte auf der Folie und weiße kleine Punkte bei der Farbenanzeige. Die Lösung erfolgt nach dem Standard-Herstellungsverfahren, d. h. 5% Salzsäure-Alkohol (5 ml Salzsäure + 95% Alkohol 95 ml) Einweichen der Folie für 4 Stunden, heißes Wasser Spülen der Folie für 1 Stunde, destilliertes Wasser Waschen der Folie für 1 Minute, Aceton Einweichen der Folie nach 5 Sekunden Lufttrocknen (Raumtemperatur), 2% APES (2 ml APES + 98 ml Aceton) Einweichen der Folie für 5 Minuten, die Folie über Aceton (1-2 Sekunden), die Folie über destilliertes Wasser (1-2 Sekunden), 37 Grad über Nacht trocknen, Raumtemperatur Lagerung Reserve. Wenn während des Herstellungsprozesses etwas Aceton angemessen hinzugefügt werden kann, wenn der Kleber durch die allmähliche Flüchtigkeit von Aceton verdickt wird.

5. Zwischenfarbung

Die Färbungsstellen sind hauptsächlich in der Intermediate, die Intermediate Färbung aus vielen Gründen, wie Antikörper und Proteine im Gewebe durch die Interaktion von Proteinophoben zur Bildung unspezifischer Verbindungen gefärbt, um eine nicht spezifische Bindung zu vermeiden. Immunglobuline im Serum infiltrieren oft in die interstellare Gewebe und binden sich leicht an Antikörper, was zu einer interstellaren Färbung führt, insbesondereLambda- und Kappa-Färbung. Wenn die Schilddrüse Glia in das interstellare Gewebe fließt, wird auch eine interstellare Färbung durch die Thyroglobulin-Färbung auftreten. Unreine Antikörper oder Antikörper, die kontaminiert sind, können auch die Intermedianfärbung auftreten, wir hatten eine CD20-Antikörper-Unreinheit, die neben der Färbung von B-Zellen auch die Intermedianfärbung hatte.

6. Zellplasma Färbung

Plasma Färbung ist allesDie meisten J-Färbungen in der "Noise" Färbung sind betrügerisch, die Färbungszone ist innerhalb der Zellen begrenzt, die Intermediate ist nicht gefärbt und sieht fast identisch mit der Färbung einer echten Immunantwort aus, die schwer zu unterscheiden ist. Das Plasma enthält mehr Proteine, daher können viele unspezifische Färbungen neben der Intermediate auch im Plasma auftreten. Die durch diese Ursache verursachte Färbung kann durch Serumschluss gelöst werden. Es gibt auch Färbungen, die durch endogene Enzyme verursacht werden, wie Hämoglobin (rote Blutkörperchen), Myoglobin (Muskelzellen), Zytochrome (Granulate, Mononukleöse Zellen), Hydrogenperoxidase (Leber, Nieren), die mit Wasserstoffperoxid verschlossen werden können. Die Färbung des Plasmas durch die Verzehrung verschiedener Antigene oder Fc-Fraktionen durch Makrophagen ist nicht einfach zu vermeiden, kann aber durch die morphologische Erkennung der Makrophagen Aufmerksamkeit erregen. Endogenes Biotin s Färbung ist am meisten trügerisch, da es weit verbreitet ist in Gewebezellen, unsere Ergebnisse zeigen: Endogenes Biotin s in gefrorenem Gewebe, nach der Fertigung von Marin-Paraffinen ist das Biotin s verschlossen, nach der Erhitzung der Antigen-Reparatur verursacht die Endogene Biotin s Exposition, die Intensität der Endogene Biotin s Exposition in verschiedenen Geweben variiert, von schwach positiv (+) bis stark positiv (+++), Endogenes Biotin s in der Verteilungsform im Gewebe, sowohl in der Verbreitung als auch in der diffusen Verteilung, hauptsächlich in körperlicher Form im Plasma vorhanden, Endogenes Biotin s ist weit verbreitet in dem epitelialen Gewebe vorhanden, insbesondere im Adrenoepitelialen Gewebe, es gibt auch einige nicht-epiteliales Gewebe Die Stärke der Substanz-Exposition ist mit der Reparaturflüssigkeit verbunden, deren Intensitätssteigerung folgt: Zitronensäure, EDTA、EGTA， Endogenes Biotin, dem thermische Antigen-Reparatur ausgesetzt ist, kann durch Eierkreisung geschlossen werden, und das zweistufige Polymer-System zur Nicht-Biotin-Detektion (EliVision, EnVision) verhindert Biotin-Störungen.

7. Zellkernenfärbung

Ungerechte Gewebebehandlung kann Zellkernenfärbung auftreten, wie Gewebe in IIZu lange Einweichung in Benzin (z. B. von Freitag bis Montag), zu lange Einweichung in Puffer, trockenes Gewebe, pH-Wert der Mikrowellen-Reparatur und falsche Reparaturzeit oder zu wenig Reparatur während der Reparatur, ohne Gewebe usw. Die Lösung besteht darin, strikt nach Betriebsrutinen zu arbeiten. Abgesehen von normalen, echten positiven Signalen trifft die Immunhymose häufig auf eine ungewöhnliche Hintergrundfärbung. Diese ungewöhnlichen Färbungen werden als "Geräusch" -Färbungen bezeichnet. "Geräusch" -Färbungen sind vielfältig und haben eine Vielzahl von Gründen, die zur Erleichterung zusammengefasst werden.

1. Färbung der Kanten

Eine häufige Färbung ist auch ein Phänomen, das als Randeffekt bezeichnet wird. Gründe dafür :(1) Geweberand und Gläser nicht fest geklebt, das Randgewebe schwebt frei in der Flüssigkeit, jede Reinigung ist nicht einfach, um das Reagenz unter dem Gewebe zu waschen. Lösung: Herstellen Sie eine qualitativ hochwertige Folie (APES oder Polylysin), schneiden Sie möglichst dünne Gewebeschneiden, nicht dicker als 4 Mikron, die Vorbehandlung des Gewebes sollte reguliert werden, um die Auswahl von Gewebe zu vermeiden, das mehr Knockout hat. (2) das auf dem Schnitt getropfte Reagenz bedeckt das Gewebe nicht ausreichend, das Reagenz am Rande trocknet zunächst leicht und die Konzentration ist höher als das zentrale Gewebe, was zu einer tiefen Färbung führt. Lösung: Um das Gewebe vollständig zu bedecken, sollte das Reagenz 2 mm über die Geweberande hinaus liegen.

2. Zwischenfarbung

Die Färbungsstellen sind hauptsächlich in der Intermediate, die Intermediate Färbung aus vielen Gründen, wie Antikörper und Proteine im Gewebe durch die Interaktion von Proteinophoben zur Bildung unspezifischer Verbindungen gefärbt, um eine nicht spezifische Bindung zu vermeiden. Immunglobuline im Serum infiltrieren häufig in die interstellare Gewebe und binden sich leicht an Antikörper, was eine interstellare Färbung verursacht, insbesondere bei Lambda- und Kappa-Färbungen. Wenn die Schilddrüse Glia in das interstellare Gewebe fließt, wird auch eine interstellare Färbung durch die Thyroglobulin-Färbung auftreten. Unreine Antikörper oder Antikörper, die kontaminiert sind, können auch die Intermedianfärbung auftreten, wir hatten eine CD20-Antikörper-Unreinheit, die neben der Färbung von B-Zellen auch die Intermedianfärbung hatte.

3. „Sonnenfarbe“

Es bezieht sich auf die Hälfte der Färbung des Gewebes und die Hälfte ohne Färbung, die eine klare oder weniger klare Kreuzung der beiden Färbungsergebnisse bildet. Die Ursache dafür ist, dass das Reagenz nur einen Teil des Gewebes bedeckt und nicht das gesamte. Wenn nach dem Zusatz des Reagents das Reagentium nicht streuen lassen und sich auf ein Teil des Gewebes konzentrieren. In der Regel sollte nach dem Zusatz des Reagents, genau zu sehen, ob ein Gewebe nicht durch das Reagentium beendet ist.w Vollständige Abdeckung, falls dies der Fall ist, empfiehlt es sich, das Reagenz mit Zahnstiften statt mit Saugköpfen oder Reagenzflaschenmünden abzuleiten, um das gesamte Gewebe zu bedecken. Darüber hinaus ist die Färbungsbox ungleich, die Schnitte neigen, obwohl das Reagenz am Anfang das gesamte Gewebe bedeckt hat, fließt das Reagenz später zur Seite und ein Teil des Gewebes ist nicht mit dem Reagenz bedeckt. Für solche Probleme ist es einfach zu erkennen und zu lösen, wenn man nur aufmerksam ist oder denkt.

4, Flachfarbung

Die Färbungszone in der Scheibe ist östlich und westlich verteilt, die Gründe für dieses Problem sind:(1) das Wasser ist nicht ausgeschöpft, wenn die Blasen lokal entstehen, um das Gewebe zu erheben, wenn das Reagenz nach der Eindringung der Färbung nicht leicht zu waschen ist, die Farbe ist zu tief. Die Lösung besteht darin, dass die Blasen in der Drift-Box verschwinden sollten, die Trocknungsstelle kann nicht flach sein, sollte eine Schrägung von etwa 45 Grad haben, um den Wasserstrom zu fördern und zu verdampfen (2) Gewebe zu zerstören, nach dem Gewebe zu zerstören, Enzyme zu freisetzen, Proteine zu freisetzen, zu zerbrechen, komplexe Peptidenkettenreste (wie Fc-Abschnitt) können mit I- oder / und II-Anti-Bindungen zur endgültigen Färbung führen. Die Lösung besteht darin, dass bei der Auswahl der Färbung von Schnitten die Auswahl von Schnitten mit mehr nekrotischem Gewebe vermieden werden sollte. (3) bei der Herstellung von APES-Filmen ist die Konzentration des Klebstoffs zu hoch und hinterlässt nach dem Trocknen weiße kleine Punkte auf der Folie und weiße kleine Punkte bei der Farbenanzeige. Die Lösung erfolgt nach dem Standard-Herstellungsverfahren, d. h. 5% Salzsäure-Alkohol (5 ml Salzsäure + 95% Alkohol 95 ml) Einweichen der Folie für 4 Stunden, heißes Wasser Spülen der Folie für 1 Stunde, destilliertes Wasser Waschen der Folie für 1 Minute, Aceton Einweichen der Folie nach 5 Sekunden Lufttrocknen (Raumtemperatur), 2% APES (2 ml APES + 98 ml Aceton) Einweichen der Folie für 5 Minuten, die Folie über Aceton (1-2 Sekunden), die Folie über destilliertes Wasser (1-2 Sekunden), 37 Grad über Nacht trocknen, Raumtemperatur Lagerung Reserve. Wenn während des Herstellungsprozesses etwas Aceton angemessen hinzugefügt werden kann, wenn der Kleber durch die allmähliche Flüchtigkeit von Aceton verdickt wird.

5. Zellplasma Färbung

Die Plasma-Färbung ist die täuschendste Färbung aller "Geräusche", die Färbungszone ist innerhalb der Zellen begrenzt, die Intermediate ist nicht gefärbt und sieht fast identisch mit der Färbung der echten Immunantwort aus, die schwer zu unterscheiden ist. Das Plasma enthält mehr Proteine, daher können viele unspezifische Färbungen neben der Intermediate auch im Plasma auftreten. Die durch diese Ursache verursachte Färbung kann durch Serumschluss gelöst werden. Auch durch endogene Enzyme verursachte Färbungen, wieHämoglobin (rote Blutkörperchen)Myoglobin (Muskelzellen), Zytochrom (Granulate, Mononukleüsen), Hydrogenperoxidase (Leber, Nieren), die mit Wasserstoffperoxid verschlossen werden können. Die Färbung des Plasmas durch die Verzehrung verschiedener Antigene oder Fc-Fraktionen durch Makrophagen ist nicht einfach zu vermeiden, kann aber durch die morphologische Erkennung der Makrophagen Aufmerksamkeit erregen. Endogenes Biotin s Färbung ist am meisten trügerisch, da es weit verbreitet ist in Gewebezellen, unsere Ergebnisse zeigen: Endogenes Biotin s in gefrorenem Gewebe, nach der Fertigung von Marin-Paraffinen ist das Biotin s verschlossen, nach der Erhitzung der Antigen-Reparatur verursacht die Endogene Biotin s Exposition, die Intensität der Endogene Biotin s Exposition in verschiedenen Geweben variiert, von schwach positiv (+) bis stark positiv (+++), Endogenes Biotin s in der Verteilungsform im Gewebe, sowohl in der Verbreitung als auch in der diffusen Verteilung, hauptsächlich in körperlicher Form im Plasma vorhanden, Endogenes Biotin s ist weit verbreitet in dem epitelialen Gewebe vorhanden, insbesondere im Adrenoepitelialen Gewebe, es gibt auch einige nicht-epiteliales Gewebe Die Stärke der Substanz-Exposition ist mit der Reparaturflüssigkeit verbunden, deren Intensitätssteigerung folgt: Zitronensäure, EDTA、EGTA， Endogenes Biotin, dem thermische Antigen-Reparatur ausgesetzt ist, kann durch Eierkreisung geschlossen werden, und das zweistufige Polymer-System zur Nicht-Biotin-Detektion (EliVision, EnVision) verhindert Biotin-Störungen.

6. Zellkernenfärbung

Ungerechte Gewebebehandlung kann Zellkernenfärbung auftreten, wie Gewebe in IIZu lange Einweichung in Benzin (z. B. von Freitag bis Montag), zu lange Einweichung in Puffer, trockenes Gewebe, pH-Wert der Mikrowellen-Reparatur und falsche Reparaturzeit oder zu wenig Reparatur während der Reparatur, ohne Gewebe usw. Die Lösung besteht darin, strikt im Einklang mit den Betriebsregeln zu arbeiten.。