Nukleinsäureextraktion und Reinigung Kit Marke

Vorteile:

1.Spezifische Eigenschaften: Alle in den Produkten verwendeten Vorläufer wurden gründlich bioinformatisch analysiert.GenBankUnd den Vergleich einer eigenen großen Datenbank, um sicherzustellen, dass jeder verwendete Prototyp eine Spezies- oder Serotypspezifische Gensequenz ist, die spezifische Detektion von Bakteriensorten und Serotypen erreichen kann.Gut .

2.Reproduzierbarkeit: Alle Produkte der Serie wurden durch eine Vielzahl von experimentellen Stämmen verifiziert und haben eine Reproduzierbarkeit vonGut .

3.Empfindlichkeit: Diese Serie ermöglicht eine hochempfindliche Detektion von Bakterien, wenn die Konzentration von Bakterien in der Probe erreicht wird103cfu/mlSie können direkt untersucht werden, ohne einen mühsamen Bakterierungsprozess zu erfordern.

4.Praktische Wirksamkeit: Ein breites Spektrum von Tests deckt schwerwiegende Gefahren für den menschlichen Körper ab17Atemwege und Darm pathogene Bakterien, die eine schnelle Prüfung von klinischen Proben und anderen Umweltproben erreichen können, der gesamte Prüfprozess ist3-4Eine Stunde.

5.Vorteile1Reichliche Ressourcen, außerGenBankNeben den veröffentlichten Sequenzen hat das Unternehmen auch eine große Anzahl von Stämmen durchgeführt, um eine gute Konservativität und Spezifizität der ausgewählten Vorläufer theoretisch zu gewährleisten.

6.Vorteile2: Diese Reihe von Kits wurde durch eine Vielzahl von konservativen und spezifischen Experimenten geprüft, mit den reichen Bakterien-Ressourcen des Unternehmens, jedes Testkit wurde20Konservative Validierung von übrigen Standardstammen und klinischen Stämmen und40Spezifische Validierung der übrigen Standardstämme und klinischen Stämme sorgt dafür, dass während der Anwendung keine falsch positiven oder falsch negativen Berichtsergebnisse auftreten.

RNA und DNA Extraktion:

Crack: Crack-Formeln können aufgrund des Extrahierens Die DNA und die RNA unterscheiden sich immer noch, aber das gemeinsame ist ein Lysenpuffer, der hohe Konzentrationen von isolierten Salzen enthält.

Wirkung von Chaotropen: Chaotropen zerstören die Wechselwirkung zwischen Wasserstoffbindungen und Hydrophobie. Zu den isolierten Salzen gehören Guaninhydrochlorit, Guanincyanat, Harnstoff und Lithium-Perchlorit.

Waschmittel: Neben dem Entflüssigungsmittel gibt es in der Regel auch einige Entreinigungsmittel in dem Crackungspuffer, um das Protein zu lösen und zu spalten.

溶JuniEnzyme und Protease K: Abhängig vom Typ der Probe können auch mit Enzymen spaltet werden. Protease K ist einer davon und wirkt tatsächlich besser in diesen Degenerationspuffern; Wenn die Proteinedegeneration zunimmt, wird die Rolle der Protease K entsprechend verstärkt. Trotzdem löstJuniEnzyme wirken nicht bei der Degeneration und sind daher löslichJuniDie enzymatische Behandlung erfolgt in der Regel vor der Zugabe des degenerierten Salzes.

Extraktionsschritte:

1. Nehmen Sie die Probe aus dem Kühlschrank mit minus 80 und legen Sie sie langsam auf Eis auftauten; (Vorkühlung der Zentrifuge auf 4 Grad)

2. Nach dem Auftauen (rot), fügen Sie 200 μl Chlorform hinzu (das Chlorform-Volumen ist 1/5 des Trizol-Volumens hinzugefügt), schalten Sie stark (milchweisrot) und lassen Sie 10 min auf Eis stehen. (Chlorform ist ein organisches Lösungsmittel, das effektiv die organische Phase und die anorganische Phase schnell trennt. Die organische Phase ist hauptsächlich Phenol und Protein gebunden, wodurch sich Protein und RNA trennen und RNA in die Wasserphase eintritt.) ）

3. in der vorgekühlten Zentrifuge platziert, Zentrifuge (4 Grad, 12.000 U/min, 15 min), nach der Zentrifuge ist offensichtlich in drei Schichten aufgeteilt (die obere farblose transparente Wasserphase ist die RNA-Schicht, die dünne Milchweiße in der Mitte ist die DNA-Schicht und die untere Schicht ist die rote Proteinschicht).

4. Vorsichtig langsam aufsaugen, ca. 400 μl (lieber weniger aufsaugen, nicht mehr aufsaugen), in eine andere neue 1,5 ml RNase-freie EP-Röhre setzen, ein anderes Volumen Isopropanol hinzufügen, nach oben und unten umgekehrt vermischen und 15 min bei Normaltemperatur stehen lassen.

5. Zentrifuge (4 Grad, 12.000 Umdrehungen pro Minute, 15 min), sichtbare weiße Fällung (manchmal können Zellen weniger Fällung sehen, können negative zwanzig oder negative achtzig zwei Stunden platziert werden, bevor die nächsten Schritte fortgesetzt werden)

Hinzufügen von 950 µl 75% Ethanol in jedem Röhrchen und umgekehrt (denken Sie daran, nicht mit einer Pistole zu mischen, so dass die RNA aufgelöst wird).

Zentrifuge (4 Grad, 12.000 Umdrehungen pro Minute, 10 min), sichtbar weiße Niederlage am Boden.

8. Nach der Zentrifuge, entfernen Sie die obere Reinigung, setzen Sie die Zentrifuge wieder, waschen Sie die restliche Flüssigkeit mit einer Pipette von 10 μl, öffnen Sie den Deckel und trocknen (ca. 5 min).

9. Jede Probe fügt eine angemessene Menge DEPC-Wasser (in der Regel 20 ~ 30 μl, manchmal keine Niederlage zu sehen, kann 10 μl DEPC-Wasser aufgelöst) je nach der Niederschlagsgröße hinzu, blast gelöste RNA, 11. Etage Enzym-Maß-Konzentration, OD-Wert (260/280 = 1,8-2,0) Marker, minus achtzig erhalten.

Hinweis: Für Neutrophile ExtraktionRNA empfiehlt eine Zellzahl größer als 2x106/Probe;

BemerkungTragen Sie während der Operation eine Maske.

Entwurfsanleitungen sollten den folgenden Prinzipien entsprechen:
Eingangslänge: 15-30bp, häufig etwa 20bp verwendet.
② Primärvergrößerungsbereich: Bei 200-500bp ist es geeignet, unter bestimmten Bedingungen kann ein Fragment auf 10kb erweitert werden.
3. Primärbasis: G + C-Gehalt von 40-60% ist günstig, G + C zu wenig Verstärkungseffekt ist schlecht, G + C zu viel anfällig für nicht spezifische Streifen. ATGC ist gut zufällig verteilt und vermeidet eine Reihenfolge von mehr als 5 Purin- oder Pyramidinukleotiden.
Vermeiden Sie die sekundäre Struktur im Inneren des Primiers, vermeiden Sie die Komplementarität zwischen den beiden Primiers, insbesondere die Komplementarität des 3'-Endes, sonst wird das Primierdimer gebildet und ein nicht spezifisches Verstärkungsband erzeugt.
Die Basis des 3'-Endes des Vorgangs, insbesondere die endgültige und rückwärts liegende Basis, sollte streng gepaart werden, um zu vermeiden, dass PCR-Fehler aufgrund der Nicht-Paarung der endgültigen Basis verursacht werden.
In den Vorläufern gibt es oder kann ein geeigneter Enzym-Schnittpunkt hinzugefügt werden, und die erweiterte Zielsequenz hat einen geeigneten Enzym-Schnittpunkt, der für die Enzym-Schnittanalyse oder das Molekularklonen sehr vorteilhaft ist.
Spezifische Eigenschaften des Präparats: Der Präparat sollte keine offensichtliche Homogenität mit anderen Sequenzen in der Nukleinsäure-Sequenzdatenbank haben.

Hinweise:

1. Die Kit aus der Kühlumgebung zu entfernen sollte nach Raumtemperatur-Gleichgewicht 15-30 Minuten verwendet werden können, das Enzym-Markierungspaket nach dem Öffnen der Platte ist nicht fertig, sollte die Platte in einem versiegelten Beutel gelagert werden. Die konzentrierte Waschflüssigkeit kann kristallisiert werden, kann bei der Verdünnung im Wasserbad erhitzt werden, während das Waschen das Ergebnis nicht beeinflusst.

2. Jeder Schritt der Probenahme sollte ein Probenahmer verwenden und seine Genauigkeit regelmäßig korrigieren, um Testfehler zu vermeiden. Die Probenzeit wird innerhalb von 5 Minuten gesteuert, wenn die Probenanzahl groß ist, wird die Probenahme mit einer Rifle empfohlen.

Bitte machen Sie gleichzeitig die Standardkurve bei jeder Messung，Machen Sie wiederholen. Bei übermäßigem Gehalt an Teststoffen in der ProbeDer OD-Wert ist größer als der OD-Wert des Standardlochs di), verdünnen Sie bitte zuerst ein bestimmtes Vielfaches (n-fach) mit der Probenverdünnungsflüssigkeit und bestimmen Sie dann, wenn Sie berechnenwiederMultiplikiert mit dem Gesamtverdünnungsvermöglichungsmehrfach (x 5 ist).

4. Dichtfilm beschränkt sich auf eine einmalige Verwendung, um Kreuzverschmutzung zu vermeiden.

5. Untergrund bitte vor Licht aufbewahren.

6. Strong nach der Bedienungsanweisung durchgeführt, müssen die Testergebnisse anhand der enzymatischen Messwerte bestimmt werden.

Alle Proben, Waschflüssigkeiten und verschiedene Abfälle sollten nach Infektionsmitteln behandelt werden.

Verschiedene Bestandteile dieses Reagents dürfen nicht gemischt werden.

Nicht veraltete Produkte verwenden.

10. Bei Abweichung von der englischen Anleitung gilt die englische Anleitung.