MTS Zellprogramm- und Zytotoxizitätstests

Chinesischer Name:MTS Zellprogramm- und Zytotoxizitätstests

Englischer Name: MTS Cell Proliferation and Cytotoxicity Detection Kit

Produktspezifikation: 500 Mal
Artikelnummer: BJ-01X6321

MTS ist eine neue Methanol-Verbindung, die mit MTT zu Tetrazolazidderivaten gehört. MTS kann durch mitochondriale Dehydrogenase in lebenden Zellen abgebaut werden, um braun-gelbe wasserlösliche Acid zu erzeugen, die durch die Bestimmung des Acid-Spektrums absorbiert wird, um die Zellproduktion zu bestimmen.

Verfahren der Zellkultur:
Vorbereitung von Kulturmitteln und Kultureinfrierungsbedingungen:
1) Vorbereitung des F-12K-Mediums; Hochwertiges Rinderserum, 10%; Doppel, 1 Prozent.
2) Kulturbedingungen: Gasphase: Luft, 95%; Kohlendioxid, 5 Prozent. Temperatur: 37 ° C, die Luftfeuchtigkeit im Ausbauraum beträgt 70% -80%.
3) Gefrierflüssigkeit: 90% Serum, 10% DMSO, jetzt verfügbar.
2. Zellbehandlung:
1) Erholungszellen: Einfrierrohr mit 1 ml Zellsuspension schnell in ein 37 ° C-Wasserbad (die Oberfläche ist unter dem Gefrierrohrdeckel) schütteln und auftauen, in eine 15 ml Zentrifugerrohr mit 4 ml Medium, die zuvor vorbereitet ist, gleichmäßig vermischen. Zentrifugieren Sie bei 1000 RPM für 4 Minuten, entfernen Sie die Oberflüssigkeit und blasen Sie nach Zugabe von 1 ml Medium. Alle Zellsuspensionen werden dann über Nacht in eine Kulturflasche mit 5 ml Medium kultiviert. Am nächsten Tag wechseln und die Zelldichte prüfen.
2) Zelltransplantation: Wenn die Zelldichte 80% -90% beträgt, kann eine Zelltransplantation durchgeführt werden.

Zellkulturmethoden:
1. Zelltransmission: Zelldichte erreicht 80-90%
① Entfernen Sie die Kultur und reinigen Sie sie 1-2 Mal mit PBS oder physiologischem Salzwasser;
② 2 ml 0,25% (T25-Flasche) hinzufügen, damit die gesamte Flasche oder die Schale bedeckt und in die Verdauungskammer abgedeckt wird;
②1-2 min, beobachten Sie die Zellen unter dem Mikroskop, wenn die meisten Zellen zurückziehen und eine kleine Anzahl von Zellen fallen, blasen Sie sanft die Verdauung zu bestätigen, nachdem Sie * das Medium hinzufügen, um die Verdauung zu beenden; Wenn die Zellen immer noch an die Wand kleben, geben Sie sie zurück in die Kultivkammer, um die Verdauung fortzusetzen, bis sie leicht niederblasen können;
4 min Zellsuspension unter den Bedingungen von etwa 1000 RPM zu zentrifizieren und zu entfernen;

Die suspendierten Zellen werden direkt zentrifugiert gesammelt und die Zellen werden nach der Resuspension in eine neue Kulturflasche aufgeteilt.
2. Erholung der Zellen:
① Schnell schütteln Sie das Gefrierrohr in 37 ° C warmem Wasser schmelzen, die Zeit ist etwa 1 min, fügen Sie 4-5 ml Medium zu mischen.
② Zentrifugieren Sie 4min unter den Bedingungen von etwa 1000RPM, entfernen Sie die Reinigung, fügen Sie 1-2ml Medium und blasen Sie die Zellsuspension in die Kulturflasche hinzu und fügen Sie die angemessene Menge an Medium hinzu.
3. Zellfrieren: Zellfrieren, bis der Zellwachstumszustand gut ist
① Entfernen Sie die Kultur, waschen Sie 1-2 Mal mit PBS oder physiologischem Salzwasser und fügen Sie 1 ml 0,25% (T25-Flasche) hinzu
② nach 1-2 min, beobachten Sie die Zellen unter dem Mikroskop, die meisten der Zellen rücken sich zurück und eine kleine Anzahl von Zellen fallen, blasen Sie sanft die Verdauung zu bestätigen, nachdem * Medium hinzugefügt wurde, um die Verdauung zu beenden;
② Zellsuspension unter Bedingungen von ca. 1000RPM 4 min zentrifugieren, entfernen und 1 ml Gefrierflüssigkeit zur Zellsuspension hinzufügen;
4 4 4 Stunden später das Gefrierrohr in den Kühlschrank in den Kühlschrank mit -80 ° C-80 ° C-Kühlschrankschrankschrankschrank und 4 Stunden in den Kühlschrankschrankschrankschrankschrank, 4 Stunden und nach 4 Stunden 4 Stunden 4 Stunden 4 Stunden 4 Stunden 4 Stunden Stunden Stunden Stunden

TM3 (Maus-Hoden-Interplasma-Zellen) 5 x 106 Zellen / Flasche x 2

TSCCa (menschliche Zungenkrebszelle) 5 x 106 Zellen / Flasche x 2

U-2 OS (menschliche Knochensarkomzellen) 5 x 106 Zellen / Flasche x 2

U251 (menschliche Gliomzellen) 5 x 106 Zellen / Flasche x 2

U-87 MG (menschliche Gliomzellen) 5 x 106 Zellen / Flasche x 2

U-937 (menschliche Gewebezellen Lymphozyten) 5 x 106 Zellen / Flasche x 2

V79 (Hamster Lungenzellen) 5 x 106 Zellen/Flasche x 2

VCaP (menschliche Prostatakrebszellen) 5 x 106 Zellen/Flasche x 2

Vero (afrikanische grüne Affe Nierenzellen) 5 x 106 Zellen / Flasche x 2

WI-38 (menschliche embryonale Lungenzellen) 5 x 106 Zellen / Flasche x 2

WISH (menschliche Membranzellen) 5 x 106 Zellen / Flasche x 2

Y1(Y-1) (Maus-Nebennieren-Kortikozyten) 5 x 106 Zellen/Flasche x 2

YAC-1 (Mauslymfomzellen) 5 x 106 Zellen/Flasche x 2

ZR-75-1 (menschliche Brustkrebszellen) 5 x 106 Zellen / Flasche x 2

ZR-75-30 (menschliche Brustkrebszellen) 5 x 106 Zellen / Flasche x 2

16HBE (menschliche Bronchiepilzellen) 5 x 106 Zellen / Flasche x 2

801-D (menschliche gigantische Lungenkrebszellen) 5 x 106 Zellen/Flasche x 2

A2 (menschliche zystische Krebszellen) 5 x 106 Zellen / Flasche x 2

A-427 (menschliche Lungenkrebszellen) 5 x 106 Zellen / Flasche x 2

A-498 (menschliche Nierenkrebszellen) 5 x 106 Zellen / Flasche x 2

A875 (menschliche Melanomazellen) 5 x 106 Zellen / Flasche x 2

Lunge α/beta Hydrolyse Protein 3 Antikörper

Adenosin-Triphosphat-Bindungsbox-Transporter-Antikörper F-Untereinheit 3

Adenosin-Triphosphat-Bindungsboxen-Transporter-Protein-A-Untereinheit-5-Antikörper

ADCK1 Protein Antikörper

Antikörper gegen Protein 4

α/β-Hydrolyse 4 Antikörper

ADCK2 Protein Antikörper

Acetaldehydrogenase 16 Familie A1 Antikörper

Anhaftungsmolekularer IgG-ähnlicher Domänenprotein 3 Antikörper

Ethanoldehydrogenase 1 Antikörper

Delta-Aminoacetylpropionat-Dehydratase-Antikörper

Protein 4 Antikörper gegen Myosalidale Sklerose

α2 Globulin Antikörper

ACCSL Protein Antikörper

Protein Antikörper

Beta-Amyloid-Vorläuferprotein-Bindungsprotein-3-Antikörper

Asteroid Antikörper

Systemischer lupus-assoziierter Protein TREX1 Antikörper

Phosphorylierende Systemische Macular Lupus Priority Protein TREX1 Antikörper

Phosphorylierung des systemischen Macular Lupus-assoziierten Proteins TREX1 Antikörper

MTS Zellprogramm- und ZytotoxizitätstestsKopf-assoziierter Proteinkomplex AP-2 μKette 1 Antikörper

Phosphorylierungsverbindungsbezogener Proteinkomplex AP-2 μChain 1 Antikörper

Membran Adhesive Protein 7 Antikörper

Betriebsverfahren
1, in der 96-Loch-Platte Zellen 100 μL / Loch hinzufügen, in der Regel Zellprogramm Experiment pro Loch 100 μl 2000 Zellen hinzufügen, Zytotoxizität Experiment pro Loch 100 μl 5000 ~ 10000 Zellen hinzufügen (spezifische Anzahl der Zellen pro Loch verwendet, muss je nach der Größe der Zelle, Zellprogramm Geschwindigkeit schnell und langsam entscheiden). Legen Sie 37 ° C 5% CO2 Zellkultur für 24 Stunden.
2. Fügen Sie 0 bis 10 μL der getesteten Verbindung in geeigneten Konzentrationen hinzu.
Inkubieren Sie die 96-Loch-Platte zur richtigen Zeit in einem Zellkulturbaum mit 5% CO2-Luft und 100% Luftfeuchtigkeit bei 37 ° C.
5 x MTT mit einer Verdünnungslösung in 1 x MTT-Lösung verdünnen.
Zu jedem Loch fügen Sie 50 μL 1 x MTT-Lösung hinzu und inkubieren Sie es für 4 Stunden bei 37 ° C, so dass MTT zu Armor reduziert wird.
6. Saugen Sie die obere Flüssigkeit aus, fügen Sie 150 μL DMSO pro Loch hinzu, um die Schimmel zu lösen und schütteln Sie mit einem Flachplattenschüttelbett.
Das Enzym-Calibrator detektiert die optische Dichte jedes Lochs bei einer Wellenlänge von 570 nm (z. B. kein 570 nm-Filter, ein Filter von 560-600 nm kann verwendet werden).
8. Analyse der Ergebnisse
a、 Überlebensrate der Zellen: subtrahieren Sie den OD-Wert der einzelnen Testbohren von dem Grund-OD-Wert (* Medium plus MTT, ohne Zellen) oder dem leeren Medikamentpor-OD-Wert (* Medium plus unterschiedliche Verdünnung des Testmedikaments plus MTT, ohne Zellen) und den OD-Wert der jeweiligen wiederholten Bohren wird in Durchschnitt ± SD ermittelt. Die Überlebensrate der Zellen ist in T / C% ausgedrückt, T ist der OD-Wert der zugesetzten Zellen und C ist der OD-Wert der Kontrollzellen. Zell-Überlebensrate % = (Dosierung Zell OD / Kontrollzell OD) × 100
b、 Ermittlung der Arzneimittelkonzentration bei T/C = 50% (IC50) und der Arzneimittelkonzentration bei T/C = 10% (IC90)