MTT-Testkit

Produktparameter:

MTT wird weit verbreitet, um das Zellwachstum zu erkennen, unter dem Prinzip, dass MTT durch Dehydrogenase-Reduktion in lebenden Zellen Mitochondrien zu dunkelviolettem Formazan kristallisiert werden kann, während tote Zellen diese Aktivität nicht haben. Dunkelviolettes Formazan-Kristall nach der Auflösung kann seine Konzentration durch Messung der Lichtabsorption mit einer Wellenlänge von 490 nm bestimmt werden und daraus die Vitalität der Zelle bestimmt werden, je stärker die Zellverpflanzung ist, desto höher ist die Absorption; Je größer die Zytotoxizität ist, desto geringer die Absorption.

Produktbeschreibung:

Versuchsbericht:

Trennung und Kultivierung:

Entfernen Sie unter sterilen Bedingungen das atriale Gewebe von Ratten im Alter von 1-3d SD, waschen Sie diesen Gewebeblock zweimal mit PBS und schneiden Sie schließlich das Gewebe in eine Größe von etwa 1 mm 3;

4 ml Enzymverdauung (0,1% und 0,1% Kollagen Typ I) in den Gewebeblöcken hinzufügen, 10s vermischen, 10 min unter 37 ° C verdauen lassen, anschließend mit einem Tropfenschlag zu einer Einzelzellsuspension geblasen, natürlich ausfällen und das Klar sammeln, nach 4 ° C mit 10% FBS-Medium zur Beendigung der Verdauung platziert;

3, das restliche Gewebe 3 bis 4 ml enzymatische Verdauungslösung hinzufügen, 10s zu mischen, 37 ° C zu verdauen 10 min nach der oben genannten Methode sammeln und 4 ° C nach der Verdauung zu beenden, wiederholen Sie diesen Schritt 2-3 Mal, bis das Gewebe * verdauen wird;

4, mit 200 Mesh Edelstahl Sieb Filter Zell Verdauungsflüssigkeit, 1200r / min Zentrifuge 10min, entfernen Sie die obere Reinigung, sedimentierte Zellen mit einem 10% FBS DMEM / F12-Medium gemischt, in einer 25cm2-Kulturflasche impft, in 37 ° C, 5% CO2-Kultivkammer platziert;

5, nach 1 Stunde der Differenz-Klebung, saugen Sie das Medium aus und impfen Sie in einer 6-Loch-Platte nach den experimentellen Bedürfnissen, um die Kultur fortzusetzen;

Immunfluorescenzprüfung:

1, warten Sie auf das Wachstum der atrialen Muskelzellen auf 80% Fusion, entfernen Sie das Medium, spülen Sie die Zellen zweimal mit PBS, je 10 Minuten, und fixieren Sie die Zellen mit 4% Polyformaldehyde bei Raumtemperatur für 15 Minuten;

Spülen Sie die Zellen mit PBS zweimal, jeweils 10 min, und dann mit 0,1% Triton X-100-Membran für 15 min unter 4 ° C-Bedingungen;

Spülen Sie die Zellen mit PBS zweimal, jeweils 10 Minuten, und schließen Sie die Zellen mit 4% BSA für 30 Minuten bei Raumtemperatur;

Verdünnen Sie alpha-Actin im Verhältnis von 1: 100 und legen Sie es dann über Nacht in einem 4 ° C Kühlschrank, um die Zellen zu inkubieren;

5, PBS spülen Sie die Zellen dreimal, jeweils 10 min, verdünnen Sie die Anti-α-Aktin-Resistenz im Verhältnis von 1: 150, 1 h unter 37 ° C;

Spülen Sie 3 Mal mit PBS, jeweils 10 Minuten, und beobachten Sie schließlich das Bild unter dem umgekehrten Fluoreszenzmikroskop und fotografieren Sie es.

Schritte zur Ausbildung:

1. Entfernen Sie die Abdeckfolie aus 75% Ethanol mit einem sterilen Seidentuch und wischen Sie es rein, nicht mit Garben;

2. Legen Sie die Deckschläger vorsichtig in eine 6-Loch-Kultivplatte (ein Stück pro Loch) oder eine Petri-Schale (jede Flachplatte kann 2-3 Stück platziert werden);

2-3 Stunden in einem Bereich von 20-30 cm von UV-Licht;

4. Die gezählte Zellsuspension in die Platte verschieben, damit die Deckscheibe * in die Kulturflüssigkeit eingetaucht wird;

5. Inkubieren Sie die Platte in einem 5% CO2-Wasserbad-Inkubator bei 37 ° C für 2-3 Tage, wenn die klebenden Zellen bis zu 2/3 der Bodenfläche der Platte wachsen, entfernen Sie die Platte, entfernen Sie die Deckplatte mit einer Deckplatte und spülen Sie sie mit destilliertem Wasser, um eine schnelle Fixierung und eine immunzytochemische Untersuchung durchzuführen.

Experimente und Beschreibung:

1. Diese Methode gilt für die Zellkultur an der Wand, nicht für die Zellkultur in Suspension, die suspendierten Zellen können mit der Tropfenmethode verwendet werden;

2. Die verwendeten Deckelscheiben sollten aus hochwertigem Glas sein und durch Chromsäurewaschung behandelt werden;

3. Die Deckelschiene ist sehr dünn und zerbrechlich, und die Bewegung ist leichter, wenn die Deckelschiene entfernt wird;

Wenn mehr Zellen mit konsistentem Wachstumszustand benötigt werden, können größere Petrischalen verwendet werden, sollten aber nicht zu groß sein, um die Verschwendung von Kulturflüssigkeiten zu vermeiden und die Verschmutzungschancen zu erhöhen;

Wenn die Zellwandwachstumsfähigkeit schlecht ist, können die Deckschläger in einer Polylysinlösung von 0,5% für 5-10 Minuten eingeweicht und natürlich getrocknet werden.

Betriebspunkte:

1) Vorwärme das Medium in einem Wasserbad von 37 ° C; Bereiten Sie ein 15 ml steriles Zentrifugerrohr vor und fügen Sie 8 ml Vorwärmmedium hinzu.

2) Entfernen Sie die gefrorenen Zellen aus dem flüssigen Stickstoffbehälter und setzen Sie sie schnell in den 37 ° C-Wasserbad (Sie können einen sauberen Becher vorbereiten und 37 ° C Wasser füllen, nachdem das Zellfrierrohr entfernt wurde, werden sie schnell in den Becher gelegt und dann allmählich in den Wasserbad übertragen). Schütteln Sie das Gefrierrohr sanft, so dass die Zellen in 1 ~ 2 min * auftauen können, so dass die Zellen so schnell wie möglich durch den anfälligsten Temperaturbereich (-5 ~ 0 ° C) passieren können. Achten Sie darauf, dass das Gefrierrohr nicht in Wasser gelangen kann und dass BRL (Rattenleberzellen) eine Verschmutzung vermeiden.

3) Wäschen Sie die Gefrierrohre mit 75% Alkohol und setzen Sie sie in den Supernet-Tisch, übertragen Sie die Zellen im Rohr in die vorbereitete Zentrifugaröhre, blasen Sie sanft die Flüssigkeit, damit die Zellen gleichmäßig verteilt werden, senken Sie die DMSO-Konzentration und vermeiden Sie die Blasen beim Blasen. Die Rohrwande mit frischem Medium zweimal waschen und in das Zentrifugerrohr übertragen.

4) 800rpm Zentrifuge 5min, werfen Sie die Reinigung, fügen Sie frisches Medium, blasen Sie zu einer Zellsuspension.

5) Übertragen Sie die Zellsuspension in die T25-Zellflasche, fügen Sie die angemessene Menge an Medium hinzu, schütteln Sie die Zellflasche sanft, um die Zellen gleichmäßig zu verteilen, und legen Sie sie in den Wärmeraum für die Kultur.

6) Am nächsten Tag beobachten Sie das Wachstum der Zellen und tauschen Sie frisches Medium aus, um tote Zellen zu entfernen. Fortsetzen Sie die Kultivierung, bis die Zellen zu 80 bis 90% convergieren, um normal zu übertragen. In der Regel müssen gerade erholte Zellen 2-3 Mal übertragen werden, bevor die nachfolgenden Experimente durchgeführt werden können, nachdem sich die Zellkraft wiederhergestellt hat.

Angiotensin-1-Konvertierungsenzym-Inhibitor-Antikörper

Antikörper gegen Apoptose Transkriptionsfaktor

α-1 Anti-Pankreas

ATP-Bindungsproteinfamilie 6 Antikörper

Adenosin-Triphosphat-Bindungsantikörper der Subfamilie G1

Antikörper gegen Lipodempfänger 2

ANGEL1 Protein Antikörper

ANGEL2 Protein Antikörper

ANKLE2 Protein Antikörper

Hodenspezifisches Ankerprotein 1 Antikörper

Ankerprotein wiederholter Domäne Protein 13B Antikörper

Ankerprotein wiederholte Domäne Protein 20A1 Antikörper

Ankerprotein wiederholte Domäne Protein 20A3 Antikörper

Ankerprotein wiederholte Domäne Protein 22 Antikörper

Ankerprotein wiederholte Domäne Protein 50 Antikörper

BC-020 (menschliche Brustkrebszellen) 5 x 106 Zellen / Flasche x 2

BC-021 (menschliche Brustkrebszellen) 5 x 106 Zellen / Flasche x 2

BC-022 (menschliche Brustkrebszellen) 5 x 106 Zellen / Flasche x 2

BE(2)-M17 (menschliche Neuromzellen) 5 x 106 Zellen/Flasche x 2

BGC-803 (menschliche Magenkrebszellen) 5 x 106 Zellen / Flasche x 2

C918 (menschliche Netzwerkmelanomzellen) 5 x 106 Zellen/Flasche x 2

CAL-27 (menschliche Zungenkrebszelle) 5 x 106 Zellen / Flasche x 2

LS 180 (menschliche Darmkrebszellen) 5 x 106 Zellen / Flasche x 2

CNE-2Z (menschliche Nasopharyngekrebszellen) 5 x 106 Zellen / Flasche x 2

MTT-TestkitCOLO 201 (menschliche Darmkrebszellen) 5 x 106 Zellen / Flasche x 2

CW-2 (menschliche Darmkrebszellen) 5 x 106 Zellen / Flasche x 2

CRT (menschliche Gliomzellen) 5 x 106 Zellen / Flasche x 2

D283 Med (menschliche Myeloblastoma-Zellen) 5 x 106 Zellen / Flasche x 2

EA.hy926 (Fusionszellen der menschlichen Nabelvenen) 5 x 106 Zellen / Flasche x 2

ECV-304 (menschliche Nabelvene Endotelzellen) 5 x 106 Zellen / Flasche x 2

EJ (menschliche Blasenkrebszellen) 5 x 106 Zellen / Flasche x 2

H-97 (menschliche hochmetastatische Leberkrebszellen) 5 x 106 Zellen / Flasche x 2